Микробиологическая диагностика микозов микроскопическое исследование. Анализы на грибок: от видов исследования до правил сдачи биоматериала и цен ПЦР-диагностика грибковых заболеваний

Для диагностики микозов могут быть использованы микроскопические, микологические (культуральные), аллергические, серологические, биологические и гистологические методы исследования. В зависимости от патогенеза материалом для исследования могут быть гной, мокрота, пораженные волосы, ногти, чешуйки кожи, пунктаты костного мозга, лимфатических узлов, внутренних органов, кровь, желчь, испражнения, биоптаты тканей и т. п.

Микроскопическое исследование включает микроскопию на-тивных (неокрашенных) и окрашенных мазков. Для приготовления нативных препаратов волосы, соскобы кожи, ногтей просветляют в 10.30 % растворах КОН или NaOH. Обработанный щелочью материал помещают на предметное стекло в каплю глицерина, накрывают покровным стеклом и микроскопируют (можно использовать фазово-контрастную микроскопию), что дает возможность изучить строение гриба, расположение спор, но окончательное заключение о видовой принадлежности гриба можно сделать только после культуральных исследований.

Для окраски мазков чаще всего используют методы Грама, Циля.Нильсена, Романовского-Гимзы. Для окраски дерматофитов применяют также методы Сабуро, Адамсона и др.

Культуральное (микологическое) исследование проводят для выделения чистой культуры гриба и ее идентификации. Используют плотные и жидкие питательные среды (Сабуро, сусло-агар, Чапека и др.). Инкубация в термостате (22.28ºС) длительная (3.4 нед). Чистую культуру гриба идентифицируют по совокупности признаков: форме колоний, их цвету, консистенции, микроскопической картине (характер мицелия, расположение спор, конидиеносцев) и другим признакам.Серологические реакции для диагностики грибковых заболеваний проводят с грибковыми антигенами по общепринятым методикам, как и для диагностики других инфекционных заболеваний (РА, РП, РСК, РНГА, РИФ и др.).

Аллергические пробы можно проводить по общепринятым методикам внутрикожным введением соответствующих аллергенов (полисахаридные и белковые фракции из клеток или клеточных оболочек, взвесь клеток убитых грибов, фильтраты культур). Для выявления ГНТ можно использовать тест дегрануляции тканевых и сывороточных базофилов, а для выявления ГЗТ – реакции торможения миграции фагоцитов, бластной трансформации лимфоцитов.

Биологическое исследование проводят на лабораторных моделях (мыши, крысы, морские свинки, кролики, собаки, кошки). Биологическую модель микоза используют для выявления патогенности возбудителя, выделения чистой культуры, изучения новых антимикотиков. Гистологическое исследование дает возможность обнаружить гриб в тканях, изучить его морфологию и особенности патологического процесса, вызванного им в организме.

Грибковые инфекции кожи, волос и ногтей относят к группе поверхностных микозов. В то же время поражения кожи могут наблюдаться и при подкожных, и при глубоких микозах, что происходит намного реже. Около половины из 400 с лишним возбудителей микозов вызывают инфекции кожи.

По данным наиболее крупного эпидемиологического исследования «Ахиллес», проводившегося в 1997-1998 годах и охватившего 11 европейских стран, включая Россию, микозы гладкой кожи составляют около 2%, а микозы стоп и онихомикозы (микозы ногтей) — 22% причин обращения к врачу. Около трети пациентов врачей-дерматологов приходят на прием по поводу микозов стоп, а почти половина обращается по поводу онихомикозов.

Современные классификации выделяют различные поверхностные микозы в зависимости от локализации поражения либо от вида (группы) возбудителя.

Микозы стоп

Микозы стоп (Tinea pedis ) распространены повсеместно и встречаются чаще, чем любые другие микозы кожи. По разным данным, ими страдает до 1/5 всего населения. Главным возбудителем микоза стоп является T. rubrum , гораздо реже микоз стоп вызывают T. mentagrophytes var.interdigitale , еще реже — другие дерматофиты. Микозы стоп, обусловленные T. rubrum и T. Mentagrophytes , имеют особенности эпидемиологии и клинической картины. В то же время возможны варианты микоза стоп, типичные для одного возбудителя, но вызванные другим.

Заражение микозом стоп, вызываемым T. rubrum (руброфития стоп), чаще происходит в семье, при непосредственном контакте с больным, а также через обувь, одежду или общие предметы обихода. Инфекция отличается хроническим течением, поражением обеих стоп, частым распространением на гладкую кожу и ногтевые пластинки. При длительном течении характерно вовлечение кожи ладоней, как правило, правой (рабочей) кисти — синдром «двух стоп и одной кисти» (Tinea pedum et manuum ). Обычно T. rubrum вызывает хроническую сквамозно-гиперкератотическую форму микоза стоп, так называемый «мокасиновый тип». При данной форме поражается подошвенная поверхность стопы. В пораженной области отмечается легкая эритема, умеренное или выраженное шелушение, а в ряде случаев — и толстый слой гиперкератоза. Гиперкератоз наиболее выражен в точках, несущих наибольшую нагрузку. В тех случаях, когда очаг сплошной и покрывает всю поверхность подошвы, стопа становится как бы одетой в слой эритемы и гиперкератоза наподобие мокасины. Заболевание, как правило, не сопровождается субъективными ощущениями. Иногда проявления руброфитии стоп минимальны, представлены легким шелушением и трещинами на подошве — так называемая стертая форма.

Заражение микозом стоп, обусловленным T. mentagrophytes (эпидермофития стоп), чаще происходит в местах общественного пользования — спортивных залах, банях, саунах, бассейнах. При эпидермофитии стоп обычно наблюдается межпальцевая форма Tinea pedis. В 3-й, 4-й, иногда в 1-й межпальцевой складке появляется трещина, по краям окаймленная белыми полосками мацерированного эпидермиса, на фоне окружающей эритемы. Эти явления могут сопровождаться неприятным запахом (особенно при присоединении вторичной бактериальной инфекции) и, как правило, болезненны. В ряде случаев поражается окружающая кожа и ногти ближайших пальцев стопы (I и V). T. mentagrophytes является сильным сенсибилизатором и иногда вызывает везикулезную форму микоза стоп. В этом случае на пальцах, в межпальцевых складках, на своде и боковых поверхностях стопы образуются мелкие пузырьки. В редких случаях они сливаются, образуя пузыри (буллезная форма).

В лечении микоза стоп используют как местные, так и системные противогрибковые средства. Местная терапия наиболее эффективна при стертой и межпальцевой формах микоза стоп. Современные антимикотики для местного применения включают кремы (например, ламизил, экзодерил, низорал), аэрозоли (ламизил, дактарин), мази (например, различные препараты клотримазола). Если эти средства недоступны, используют местные антисептики (жидкость Кастеллани, фукорцин и пр.). Продолжительность лечения составляет от двух недель при использовании современных препаратов до четырех — при использовании традиционных средств. При хронической сквамозно-гиперкератотической форме микоза стоп, вовлечении кистей или гладкой кожи, поражении ногтей местная терапия зачастую обречена на неудачу. В этих случаях назначают системные препараты — тербинафин (ламизил, экзифин) — по 250 мг в сутки в течение не менее двух недель, итраконазол (орунгал) — по 200 мг два раза в день в течение одной недели. При поражении ногтей сроки терапии продлеваются. Системная терапия показана и при островоспалительных явлениях, везикуло-буллезных формах инфекции. Наружно в этих случаях используют примочки, растворы антисептиков, аэрозоли, а также комбинированные средства, сочетающие в себе кортикостероидные гормоны и антимикотики (тридерм, лоринден С, кандид Б, микозолон). Показана десенсибилизирующая терапия.

Онихомикозы

Онихомикозы поражают около 1/10 всего населения и распространены повсеместно. Заболеваемость повышается с возрастом (до 30% после 65 лет), что связано прежде всего с патологией сосудов, ожирением, остеоартропатиями стопы, а также с сахарным диабетом. Основным провоцирующим фактором являются повреждения ногтей и кожи стопы, чаще всего при ношении тесной обуви. Онихомикозы на стопах встречаются в три-семь раз чаще, чем на кистях. Основной возбудитель онихомикозов — T. rubrum . Однако до 1/4 инфекций ногтей может быть вызвано плесневыми и дрожжевыми грибами, устойчивыми к ряду противогрибковых средств.

Выделяют три основные клинические формы онихомикоза: дистально-латеральную, проксимальную и поверхностную, в зависимости от места внедрения возбудителя. Наиболее часто встречается дистальная форма. При этом элементы гриба проникают в ноготь с пораженной кожи в области нарушенного соединения дистального (свободного) конца ногтя и кожи. Инфекция распространяется к корню ногтя, причем для ее продвижения необходимо превосходство скорости роста гриба над скоростью естественного роста ногтя в обратном направлении. Рост ногтя замедляется с возрастом (до 50% после 65-70 лет), в связи с чем онихомикозы и преобладают у пожилых людей. Клинические проявления дистальной формы — утрата прозрачности ногтевой пластинки (онихолизис), проявляющаяся как беловатые или желтые пятна в толще ногтя и подногтевой гиперкератоз, при котором ноготь выглядит утолщенным. При редкой проксимальной форме грибы проникают через проксимальный валик ногтя. Белые или желтые пятна появляются в толще ногтя у его корня. При поверхностной форме онихомикоз представлен пятнами на поверхности ногтевой пластинки. Каждая из форм онихомикоза со временем может привести к поражению всех отделов ногтя, разрушению ногтевой пластинки и утрате функции ногтя. Подобные варианты онихомикоза относят к так называемой тотальной дистрофической форме.

Кандидоз ногтей обычно сопровождается паронихией — воспалением околоногтевого валика. В результате периодических обострений паронихии возникают дистрофические изменения ногтя, проявляющиеся поперечными бороздами на ногтевой пластинке.

Основным средством подтверждения диагноза является микроскопия патологического материала (фрагменты ногтевой пластинки и выскобленный из-под нее материал) и его посев с выделением культуры. Последнее удается далеко не всегда и доступно не всем отечественным лабораториям.

В лечении онихомикозов также используют местную и системную терапию или их сочетание — комбинированную терапию. Местная терапия применима в основном только при поверхностной форме, начальных явлениях дистальной формы или поражениях единичных ногтей. В прочих случаях более эффективна системная терапия. Современные местные средства для лечения онихомикозов включают противогрибковые лаки для ногтей, в частности препарат лоцерил с удобной схемой применения (один раз в неделю). Местная терапия ведется до клинико-микологического излечения. Системная терапия включает препараты тербинафина (ламизил, экзифин в таблетках), итраконазол (орунгал в капсулах) и флуконазол (дифлюкан в капсулах). Препараты тербинафина эффективны при онихомикозе, вызванном дерматофитами T. rubrum и T. mentagrophytes , дифлюкан — дерматофитами и дрожжевыми грибами Candida , а орунгал — при онихомикозе любой этиологии. Ламизил или экзифин назначают по 250 мг в сутки в течение 6 недель и более при онихомикозе кистей и от 12 недель — при онихомикозе стоп. Орунгал назначают в режиме пульс-терапии по 200 мг два раза в сутки в течение одной недели с трехнедельным интервалом, а затем повторяют этот цикл один раз при онихомикозе кистей и не менее двух раз при онихомикозе стоп. Продолжительность лечения любым препаратом зависит от клинической формы онихомикоза, распространенности поражения, степени подногтевого гиперкератоза, пораженного ногтя и возраста больного. Для расчета продолжительности в настоящее время используется специальный индекс КИОТОС [Сергеев А. Ю., 1999]. Комбинированная терапия может быть назначена в тех случаях, когда только системной терапии недостаточно или она имеет большую продолжительность. Эффективной и удобной схемой комбинированной терапии является сочетание препарата дифлюкан (по 150 мг один раз в неделю) с одновременным или последующим назначением лака лоцерил, также один раз в неделю, до клинического излечения.

Микозы гладкой кожи и крупных складок

Микозы гладкой кожи (Tinea corporis s. circinata ) встречаются реже, чем микозы стоп или онихомикозы. Как правило, в России они вызываются T. rubrum (руброфития гладкой кожи) или Microsporum canis (микроспория гладкой кожи). Встречаются также зоонозные микозы гладкой кожи, вызванные более редкими видами дерматофитов. Микозы крупных складок (Tinea cruris ) вызываются обычно T. rubrum и Epidermophyton floccosum , встречается также кандидоз крупных складок.

Очаги микоза гладкой кожи имеют характерные особенности — кольцевидный эксцентрический рост и фестончатые очертания. За счет того, что в инфицированной коже постепенно сменяются фазы внедрения гриба в новые участки, воспалительной реакции и ее разрешения, рост очагов от центра к периферии выглядит как расширяющееся кольцо. Кольцо образовано валиком эритемы и инфильтрации, в центре его отмечается шелушение. При слиянии нескольких кольцевидных очагов образуется один большой очаг с полициклическими фестончатыми очертаниями. Для руброфитии как правило, поражающей взрослых, характерны распространенные очаги с умеренными явлениями эритемы, при этом у больного можно обнаружить и микоз стоп или кистей, онихомикоз. Для микроспории, как правило поражающей детей, заражающихся от домашних животных, характерны небольшие монетовидные очаги на закрытых участках кожи, нередко — очаги микроспории волосистой части головы.

В некоторых случаях врачи, не распознав микоз гладкой кожи, назначают на очаг эритемы и инфильтрации кортикостероидные мази. При этом воспалительные явления стихают, и микоз принимает стертую форму (так называемый Tinea incognito ).

Микозы крупных складок, обусловленные дерматофитами (Tinea cruris ), также сохраняют характерные черты: периферический валик, разрешение в центре и полициклические очертания. Наиболее типичная локализация — паховые складки и внутренняя сторона бедра.

Для кандидоза в этой локализации характерны трещины, эрозии и участки мацерированной кожи в глубине складки, сливающиеся эрозии, папулы и пустулы, составляющие очаг поражения, и аналогичные элементы-отсевы по краям очага. Все высыпания в паховой области, как правило, сопровождаются зудом.

В лечении микозов гладкой кожи и складок используют те же принципы, что и в лечении микозов стоп. На изолированные очаги назначают местные противогрибковые средства, при распространенных очагах назначают системные препараты по аналогичным схемам, а при сочетании с поражениями ногтей или волос назначают системную терапию по схемам, принятым для этих локализаций. Лечение местными препаратами ведется до клинико-микологического излечения, после чего добавляется еще одна неделя.

Разноцветный лишай

Разноцветный (отрубевидный) лишай вызывает гриб Pityrosporum orbiculare (син. Malassezia furfur ). Заболевание распространено в жарких странах, а в нашем климате поражает до 5-10% населения. Разноцветный лишай развивается чаще у лиц с повышенной потливостью, характерны обострения в жаркое время года.

Элементы разноцветного лишая располагаются на коже груди, верхней части спины, плечах. В этой области появляются мелкие пятна сначала розового, а затем желтого или кофейного, светло-коричневого цвета. На фоне загорелой кожи пятна выглядят более светлыми. Пятна склонны к слиянию с образованием крупных очагов, но могут существовать изолированно. Воспалительные явления отсутствуют, имеется незначительное отрубевидное шелушение.

В диагностике разноцветного лишая используется йодная проба Бальзера: пятна смазывают настойкой йода, после чего они приобретают темно-коричневую окраску. Под лампой Вуда очаги разноцветного лишая дают желтое свечение.

Лечение разноцветного лишая обычно проводится местными антимикотиками: кремами (низорал, ламизил), аэрозолями (ламизил, дактарин). Эти средства используют два раза в день в течение двух недель. Удобной формой является противогрибковый шампунь низорал. Его используют один раз в день в течение 5-7 дней. При распространенных поражениях и частых рецидивах разноцветного лишая назначают системные антимикотики: низорал или орунгал по 200 мг в сутки в течение одной недели.

Литература

1. Родионов А. Н. Грибковые заболевания кожи. СПб: Питер, 1998.
2. Рукавишникова В. М. Микозы стоп. М.: МСД, 1999.
3. Сергеев Ю. В., Сергеев А. Ю. Онихомикозы: грибковые инфекции ногтей. М.: Гэотар-медицина, 1998.
4. Сергеев А. Ю., Сергеев Ю. В. Кандидоз: природа инфекции, механизмы агрессии и защиты, диагностика и лечение. М.: Триада-Х, 2000.
5. Степанова Ж. В. Грибковые заболевания. М.: Крон-Пресс, 1996.

Болезни, вызванные грибками или микозы, являются распространенной проблемой. Возбудителей микозов насчитывается невероятное количество.

Ежегодно открываются учеными и описываются новые виды грибков. Несмотря на это, диагностика и лечение микозов - давно отлаженный и четкий механизм.

Виды грибковых заболеваний

У человека большинство грибков поражают слизистые оболочки и кожу.

К болезням, при которых причиной развития заболевания являются грибки, относятся:

  • дерматомикоз
  • кандидоз
  • онихомикоз
  • пёстрый или отрубевидный, разноцветный лишай
  • чёрный лишай
  • себорея
  • аспергиллёз

Методы диагностики микозов

Одна из самых популярных методик - микробиологическая диагностика микозов.

Современные методы диагностики позволяют точно определить, какой грибок был причиной возникновения болезни. В дальнейшем, это дает возможность подобрать оптимальный курс лечения. На данный момент существует три основных метода лабораторной диагностики микозов.

К ним относятся:

  • микроскопический
  • культуральный
  • серологический

Каждый из методов имеет свои преимущества. Культуральная диагностика микозов позволяет определить вид грибков. При этом есть возможность оценить чувствительность колоний к различным препаратам.

Подобный метод позволит подобрать эффективный препарат. Данный способ требует много времени на посев и выращивание колоний.

Микроскопический и серологические методы диагностики микозов требуют меньше времени на проведение. При их использовании тоже определяется вид возбудителя, но проверить его чувствительность к препаратам невозможно. В некоторых случаях возможно использование люминесцентного метода диагностики. Данный метод менее распространен ввиду его сложности.

Люминесцентный метод возможно применять лишь при поражении грибками волос. Метод малоэффективен для диагностики на ранних стадиях. Это обусловлено тем, что эффект свечения будет проявляться лишь при обильном поражении грибком волос.

Диагностика микоза стопы

Микоз стопы является одним из наиболее распространенных дерматомикозов.

Под этим термином принято понимать грибковое поражение кожи стопы и ногтей.

Помните! Заболевание отличается рецидивирующим течением.

Во время диагностики микоза стопы необходимо провести дифференциацию с рядом иных заболеваний. Диагностика микоза стопы базируется на клинических проявлениях и микроскопическом исследовании. Возможно применение культурального метода.

Лечение микозов

Ведущую роль в лечении микозов составляют противогрибковые препараты местного и системного действия.

Лечение местными антимикотиками направлено непосредственно на очаг заболевания. При этом негативное воздействие на организм в целом является минимальным.

Противомикозные препараты системного действия назначают, если:

  • местные противогрибковые препараты малоэффективны
  • заболевание имеет системный характер

Десенсибилизирующее и антигистаминные препараты назначают, когда микозы сопровождаются воспалительным процессом или аллергическими реакциями. Если к микозам присоединяется вторичная инфекция, возможно назначение антибактериальных препаратов.

Лечение грибковых заболеваний важно начинать на ранних стадиях болезни. Если процесс давний, для лечения может потребоваться больше времени.

При появлении первых симптомов незамедлительно обращайтесь за помощью к нашему врачу.

По статистике, около 20% населения нашей страны в той или иной мере страдают микозом. Но далеко не все из них обращаются за профессиональной помощью к . Одна из причин заключается в том, что люди просто не знают всех симптомов и проявлений этого заболевания.

Симптомы микоза

В первую очередь стоит отметить, что – это не какое-то определенное заболевание, а группа различных грибковых поражений кожи и её придатков. Поэтому и симптомы могут быть достаточно разнообразными, но чаще всего отмечают следующие:

  • Появление на коже шелушащихся пятен. Чаще всего они появляются между пальцами ног, на коже стоп. Часто они вызывают зуд, раздражение и другие неприятнее ощущения.
  • Изменение цвета и структуры ногтей. Они становятся желтоватыми, хрупкими, крошатся и слоятся, их поверхность может быть бугристой и неровной.
  • Трещины на коже. Часто при грибковых поражениях кожи стоп она грубеет и начинает сильно трескаться.
  • Неприятный запах. Многие пациенты жалуются на неприятный запах от пораженной кожи, особенно, при микозе стоп.

При появлении подобных признаков необходимо как можно быстрее посетить дерматолога и провести полноценную диагностику, чтобы определить, какой именно тип микоза поразил кожу.

Методики диагностики микозов

Когда пациенты обращаются к дерматологу с характерными признаками грибковых поражений кожи, то, чаще всего уже первичного внешнего осмотра врачу достаточно, чтобы поставить диагноз. Вопрос только в том, какой именно тип микоза поразил кожу.

Эта информация необходима, чтобы определить дальнейшую стратегию лечения. Для диагностики микоза могут применяться такие методики:

  • Исследование под лампой Вуда. Специальный спектр ультрафиолетового света позволяет определить наличие грибковых поражений. Этот метод очень простой и доступный, с его помощью можно не только поставить диагноз, но и контролировать ход лечения. Но он не позволяет определить тип микоза.
  • Микроскопия. Один из наиболее простых и распространенных методов диагностики микоза – это исследование под микроскопом соскоба пораженных грибком тканей. Для этого его помещают на предметное стекло. Есть два типа исследования соскоба: с использованием окрашивающих веществ и с использованием осветлителей.
  • Бактериологический посев. Один из наиболее точных способов диагностики – это бак посев на питательные среды. По внешнему виду и характеристике выросших колоний грибка врач может установить тип возбудителя. Недостаток этого метода – длительность, на выращивание колонии может потребоваться 2-3 недели. К тому же, получить результат удается только в половине случаев.
  • ПЦР-диагностика. Это один из наиболее точных и современных методов диагностики, но для определения типа микоза может потребоваться несколько анализов, что требует определенных затрат.

Стоит отметить, что диагностика микоза необходима, чтобы определить наиболее эффективный метод лечения этого заболевания. И если нет возможности немедленно посетить специалиста, можно воспользоваться услугой, которую предоставляет наша клиника и

Чешуйки или волосы кладут на предметное стекло (стекло должно быть обезжирено) и заливают одной-двумя-тремя каплями 30% раствора едкого кали или едкого натра и накрывают покровным стеклом. В течение 2-3 минут при легком подогревании на пламени спиртовой горелки на препарат слегка надавливают покровным стеклом до образования
серого облачка при исследовании чешуек. Волосы не должны быть разрушены, они при таком нагревании только набухают. При микроскопическом исследовании (увеличение в 100-200 раз) при затемненной диафрагме обнаруживаются грибковые элементы - споры или нити мицелия. Необходимым условием успешности микроскопического исследования является тщательность добывания чешуек и волос, которые должны забираться с пораженных очагов специальным пинцетом (ресничный пинцет). Необходимо обращать внимание не только на хорошо видимые волосы, корки и чешуйки, но и на мало заметные остатки волос (так называемые пеньки) и черные точки, которые извлекаются скальпелем или гистологической иглой. Никогда не следует довольствоваться указанием больного на места поражения, необходимо самому врачу внимательно осмотреть всю волосистую часть головы.

В волосе, пораженном трихофитией, споры грибка располагаются цепочкой. При микроспории споры гораздо мельче, чем при стригущем лишае, в цепочки не складываются и располагаются снаружи волоса. Внутри волоса проходят тяжи из септированного мицелия. Волос как бы одет в чехол ив спор. При парше наблюдаются полиморфные споры, грубые разнообразные нити и обычно пузыри воздуха (рис. 48).

При этом грибки не поражают весь волос сплошь, а остаются непораженные участки.
Для получения материала с гладкой кожи делают соскоб чешуек с. периферических участков поражения острой ложечкой или скальпелем. Соскоб с ногтей удобнее производить острым медицинским ножичком (скальпелем), снимая небольшие, но глубокие срезы с внутренней поверхности ногтевой пластинки или же соскабливая отрубевидный порошок с роговых пластинок ногтя.
Исходный материал кипятят в пробирке со щелочью и потом оставляют стоять в этой пробирке часов на 12-20.
После этого содержимое центрифугируется и осадок исследуется под микроскопом (метод Н. А. Черногубова).
Грибки хорошо выращиваются на искусственных питательных средах, содержащих углеводы и вещества белковой природы. Особенно распространена так называемая оригинальная среда Сабуро, пивное сусло, агар и овощи.