(RSK) - serols. reakcija, ko izmanto komplementu fiksējošo Abs un Ags kvantitatīvai noteikšanai. RSC princips ir tāds, ka specifisks imūnkomplekss pilnībā vai daļēji adsorbē C, kas pievienots sistēmai, kā kvantitatīvs saistīšanās rādītājs hemolītiskā sistēma hemolīzes modelis norāda uz imūnkompleksa neesamību diagnostikas sistēmā (negatīvs RSC), aizkavēta hemolīze - imūnkompleksa klātbūtnes dēļ (pozitīvs RSC). RSK viņi izmanto: 1) karsē 57 ° C temperatūrā 30 minūtes. s-ku, tai jābūt svaigai, bez suspendētām daļiņām, citotoksīniem, C. Eksperimentam parasti ir nepieciešami vairāki s-ki 2 atšķaidījumu daudzkārtņi atkarībā no iespējamās slimības CSC diagnostiskā titra; 2) diagnostikas pārdošanai vai speciāli sagatavotai RSK; 3) C darba devā, malas, titrējot ar Ag, ir vienādas ar titru C, un titrējot bez Ag - augstāks par titru C par 20 - 25%; 4) aitu eritrocītus vairākas reizes mazgā ar fizioloģisko šķīdumu un pagatavo 3% suspensiju; 5) hemolītiskā skābe tiek atšķaidīta 3 reizes mazāk nekā titrs, kas norādīts uz etiķetes. Visas 5 sastāvdaļas tiek ņemtas tādā pašā tilpumā (0,5 ml vai 0,25 ml). Pētījumi tiek ieviesti eksperimentālajā (diagnostikas) sistēmā. s-ku, diagnosticum, S. Sagatavojiet kontroles: s-ki - s-ku, S un fizioloģisko šķīdumu (Ag vietā); diagnosticum - diagnosticum, S un fizioloģiskais šķīdums (s-ki vietā); C-C un dubultā tilpuma sāls šķīdums; acīmredzami pozitīvs - standarta imūnsistēma, Ag, C; acīmredzami negatīvs - normāls s-ka, Ag, C. Mēģenes sakrata un ievieto termostatā 37 ° C temperatūrā uz 45 minūtēm. Vienlaikus sagatavojiet hemolītisko sistēmu, sajaucot vienādos daudzumos 3% aitas eritrocītu un hemolītiskās sistēmas suspensijas, un tikpat ilgi inkubējiet to termostatā. Pēc sensibilizācijas visām testa un kontroles mēģenēm pievieno dubultu hemolītiskās sistēmas tilpumu (1 ml vai 0,5 ml). Visas mēģenes tiek turētas termostatā 37°C temperatūrā, līdz kontroles mēģenēs notiek pilnīga hemolīze (apmēram 30–40 minūtes). Ar reakcijas stadijas kvantitatīvo metodi viņi atrod atšķaidījumu, kurā hemolīzes aizkavēšanās ir vismaz 2+ (Pie pārbaudīta titra), un salīdzina to ar atpazītās slimības diagnostisko titru. Puskvantitatīvā metode ar vienu zāļu atšķaidījumu (parasti 1:5) ļauj noteikt hemolīzes aizkavēšanās pakāpi par 4+, 3+, 2+ un, pamatojoties uz to, novērtēt reakcijas intensitāti. Precīzākus rezultātus iegūst, atrodot titru, pamatojoties nevis uz 100%, bet uz 50% hemolīzi (sk. Papildinājuma definīcija). Ir piedāvāts RSC kvantitatīvās formulēšanas variants, kurā tiek lietots viens zāļu atšķaidījums, bet vairākas C devas (1; 1,5; 2; 2,5; 3; 4). Visas pārējās sastāvdaļas tiek izmantotas tādā pašā daudzumā. Vērtējot, viņi ņem vērā to, ka ko vairāk devu C savieno pētniecību. s-ka, jo vairāk At tas ir.

(Avots: Mikrobioloģijas terminu vārdnīca)

Skatiet, kas ir “Komplementa fiksācijas reakcija” citās vārdnīcās:

komplementa fiksācijas reakcija- RSK Laboratorijas metode. [Vakcinoloģijas un imunizācijas pamatterminu angļu-krievu vārdnīca. Pasaules Veselības organizācija, 2009] Tēmas Vakcinoloģija, imunizācija RSC EN komplementa saistīšanās testa sinonīmiCFTCF tests ... Tehniskā tulkotāja rokasgrāmata

KOMPLEKTĀCIJAS REAKCIJA- komplementa saistīšanās reakcija, RSK, Bordet-Zhangu reakcija [nosaukta beļģa vārdā. bakteriologi J. Bordet un O. Gengou, 1901], ļoti specifiska un ļoti jutīga seroloģiskā reakcija, kuras pamatā ir kompleksa īpašība... ... Veterinārā enciklopēdiskā vārdnīca

I Komplementa fiksācijas reakcija ir seroloģiska reakcija, ko izmanto antigēna vai antivielas noteikšanai, pamatojoties uz komplementa patēriņa (fiksācijas) novērtējumu ar antigēna-antivielu kompleksiem, sk. Imunoloģiskās izpētes metodes. II...... Medicīnas enciklopēdija

komplementa fiksācijas reakcija

komplementa fiksācijas reakcija- (RSK), ļoti jutīga un specifiska seroloģiska reakcija, ko izmanto daudzu infekcijas un invazīvu dzīvnieku slimību diagnosticēšanai. Sastāv no divām secīgām fāzēm. Pirmajā fāzē antigēnu sajauc ar testa serumu un... ... Lauksaimniecība. Lielā enciklopēdiskā vārdnīca

- (RSK; sinonīms: Bordet Zhangu reakcija, komplementa atgrūšanas reakcija novecojusi, aleksīna fiksācijas reakcija novecojusi) seroloģiskās izpētes metode, kas balstās uz iegūtā antigēna-antivielu kompleksa spēju saistīt komplementu, kas tiek atklāts... ... Liela medicīniskā vārdnīca

PAPILDINĀŠANAS REAKCIJA (FFR)- ļoti jutīgs un specifisks. seroloģiskās reakcija, ko izmanto daudzskaitļa diagnosticēšanai. infekciozs un invazīvās sieviešu slimības. Sastāv no diviem secīgiem. fāzes Pirmajā fāzē antigēnu sajauc ar testa serumu un komplementu (olbaltumvielu kompleksu... ... Lauksaimniecības enciklopēdiskā vārdnīca

- (novecojis) skatiet Komplementa fiksācijas reakciju... Liela medicīniskā vārdnīca

komplementa noraidīšanas reakcija- rus reakcija (g) komplementa saistīšanās, reakcija (g) Bordet Zhangou; reakcija (g) komplementa atgrūšana; aleksīna fiksācijas reakcija g) eng komplementa fiksācijas tests fra réaction f) de fixation du complément deu Komplementbindungsreaktion f) spa… … Darba drošība un veselība. Tulkojums angļu, franču, vācu, spāņu valodā

Skatiet komplementa fiksācijas reakciju. (

Hemolīzes reakcija.

Hemolīzes reakcija (HR) - Tā ir sarkano asins šūnu iznīcināšana, iedarbojoties antivielām, piedaloties komplementam.

RG sastāvdaļas.

1. Antigēns- 3% sarkano asins šūnu suspensija izotoniskā nātrija hlorīda šķīdumā;

2. Antiviela - hemolītiskais serums- satur serumu antivielas pret sarkanajām asins šūnām (hemolizīni); serumu iegūst, imunizējot trušus ar aitas eritrocītiem;

3. Papildināt– asins proteīnu sistēma, kas adsorbējas uz antigēna-antivielu kompleksa un veido membrānas uzbrukuma kompleksu, kas iznīcina antigēnu, t.i. iznīcina sarkanās asins šūnas vai, citiem vārdiem sakot, izraisa sarkano asins šūnu līzi ( hemolīze). Svaigi pagatavots Jūrascūciņu asins serums.

Ja mēģenē noteiktos daudzumos ievieto sarkanās asins šūnas, hemolītisko serumu un komplementu, tad dažu minūšu laikā notiks sarkano asinsķermenīšu iznīcināšana (hemolīze), kā rezultātā maisījums no tumši sarkana kļūs rozā. ("lakas asinis").

Hemolīzes reakcija tiek izmantota kā indikators, veicot komplementa fiksācijas reakciju.

Komplementa fiksācijas reakcija (CFR) ir sarežģīta seroloģiska reakcija, kas ietver 2 antigēnu-antivielu un komplementa sistēmas. 1. sistēma - specifisks, 2.- hemolītisks sistēma.

Šo reakciju izstrādāja J. Bordet un O. Zhangou, kuri konstatēja, ka antigēna-antivielu kompleksa veidošanās laikā komplements saistās ar šo kompleksu. Redzams efekts kurā nav redzams, tādēļ, lai noteiktu komplementa saistīšanos (un līdz ar to, lai noteiktu antigēna-antivielu kompleksa veidošanos, kad tie atbilst viens otram), t.i. kā indikators Tiek izmantota otrā - hemolītiskā sistēma.

RSC biežāk izmanto serodiagnostikai (antivielu noteikšanai pret patogēnu pacienta asins serumā ) gonoreja, sifiliss, garais klepus, tīfs un citas riketsiozes un daudzas vīrusu slimības. RSC izmanto arī seridentifikācijai.

RSK sastāvdaļas.

1. Antigēns– mikrobu ekstrakti, haptēni, retāk – mikrobu suspensija, t.i. antigēns var būt korpuskulārs (nešķīstošs) vai molekulārs (šķīstošs).

2 . Antiviela– slima cilvēka asins serums (serodiagnostikai) vai imūns diagnostikas serums, kas satur zināmas antivielas (ja tās ir identificētas).

3. Aitu sarkanās asins šūnas – antigēni hemolītiskā reakcija.

4. Hemolītiskais serums- satur serumu antivielas uz aitu eritrocītiem. Serums gūt imunizējot trušu ar aitas eritrocītiem.

5. Papildināt– svaigi pagatavots jūrascūciņu asins serums (šķidrs vai liofilizēts).

6. Elektrolīts – izotonisks šķīdums nātrija hlorīds.

Iestudējis RSK.

Pirms eksperimenta tiek titrēts antigēns, pacienta serums, hemolītiskais serums un komplements (tiek noteikts to titrs). Pacienta serumu 30 minūtes karsē 56°C temperatūrā.

RSK tiek veikta gadā 2 fāzes.

I fāze - specifisks: vienā mēģenē sagatavo specifisku sistēmu - vienādos daudzumos sajauc zināmu antigēnu, pacienta serumu un komplementu, citā mēģenē sagatavo hemolītisko sistēmu - aitas eritrocītu un hemolītiskā seruma maisījumu, mēģenes ievieto a. termostats 37°C temperatūrā 30 minūtes. Tajā pašā laikā tiek sagatavoti kontroles paraugi antigēnam, komplementam un hemosistēmai, kontroles paraugi ar zināma slima cilvēka serumu (pozitīvs serums) un zināma vesela cilvēka serums (negatīvs serums), kā arī ievietoti termostatā uz 30 minūtēm.

II fāze - indikators: sākuma maisījumam un visām kontroles mēģenēm pievieno vienādus hemolītiskās sistēmas daudzumus, un reakcijas rezultātus ņem vērā pēc turēšanas termostatā 30 minūtes.

DSC rezultātu uzskaite veikta ar nevainojamiem rezultātiem vadības ierīcēs .

Pozitīva reakcija(cilvēks ir slims un viņa serums satur atbilstošās antivielas pret slimības izraisītāju - antigēnu): I fāzē veidojas antigēna-antivielu kompleksi, ar kuriem pēc hemolītiskās sistēmas pievienošanas saistās komplements; II fāzē hemolīze netiek novērota, jo komplements ir saistīts ar 1. specifisko sistēmu. Redzams efekts- izglītība eritrocītu nogulsnes.

Negatīvā reakcija(cilvēks ir vesels un viņa serumā nav antivielu pret izraisītāju): antigēna-antivielu kompleksi neveidojas un komplements I fāzē paliek brīvs pēc hemolītiskās sistēmas pievienošanas II fāzē, komplements saistās ar antigēnu-antivielu kompleksi, kas šeit noteikti ir (tie ir eritrocītu-antivielu kompleksi) antieritrocītu antivielas) un izraisa sarkano asins šūnu hemolīzi. Redzams efekts- sarkano asins šūnu hemolīze, "lakas asinis"

Diagnostikā infekcijas slimības arī lietots toksīna neitralizācijas reakcija (RN) ar antitoksisku serumu, imūnfluorescences reakcija (RIF), radioimūntests (RIA), ar enzīmu saistīts imūnsorbcijas tests (ELISA).

Komplementa saistīšanās tests ir viens no tradicionālajiem seroloģiskajiem testiem, ko izmanto daudzu vīrusu slimību diagnosticēšanai, kā arī veido pamatu dažām citām pretvīrusu antivielu noteikšanas metodēm. Lai gan neitralizācijas reakcija, hemaglutinācijas inhibīcija, netiešā hemaglutinācija un enzīmu imūntests ir pārākas par komplementa saistīšanas reakciju jutības ziņā, to izskaidro tehnikas vienkāršība, agrīna antivielu noteikšana, kā arī vīrusu antigēnu identificēšana, kuriem nav hemaglutinācijas īpašību. tā plaši izmantota virusoloģiskajos pētījumos.

Tās ražošanai nav nepieciešama tik augsta antigēnu zāļu koncentrācijas un tīrības pakāpe, kas nepieciešama vairākām citām imunoloģiskām reakcijām. Turklāt daudzu vīrusu komplementu fiksējošo antigēnu grupas specifika ļauj izmantot komplementa saistīšanas reakciju masu diagnostikā: šī reakcija neatklāj celmu atšķirības un ir īpaši vērtīga, pētot antigēnu attiecības starp vīrusiem.

Pats nosaukums lielā mērā atspoguļo metodes būtību, kas sastāv no divām atsevišķām reakcijām. Pirmajā posmā reakcija ietver antigēnus un antivielas (viena no šīm sastāvdaļām ir iepriekš zināma), kā arī komplementu titrētā daudzumā. Ja antigēns un antivielas sakrīt, to komplekss saista komplementu, kas tiek noteikts otrajā posmā, izmantojot indikatoru sistēmu (aitas sarkano asins šūnu un to antiseruma maisījumu). Ja komplementu saista antigēna un antivielu mijiedarbība, tad aitas sarkano asinsķermenīšu līze nenotiek (pozitīva komplementa saistīšanās reakcija). Plkst negatīva reakcija Komplementa fiksācija, nesaistītais komplements veicina hemolīzi, pēc kuras tiek vērtēti reakcijas rezultāti.

Komplementa fiksācijas reakcijas galvenie komponenti ir antigēni (zināmi vai nosakāmi), antivielas (zināmi antiserumi vai testa serumi), komplements, hemolītiskais serums un aitas sarkanās asins šūnas; Kā atšķaidītāju izmanto izotonisko nātrija hlorīda šķīdumu (pH 7,2-7,4) vai dažādus buferšķīdumus. Antigēni un serumi var būt anti-komplementāri, t.i. spēja adsorbēt komplementu, kas aizkavē hemolīzi un izkropļo reakcijas rezultātu.

CSC antigēnus sagatavo no inficētu dzīvnieku orgāniem, inficētu vistu embriju alantoiskā vai amnija šķidruma, kā arī kultūras šķidruma pēc vīrusu kultivēšanas audu šūnu kultūrās. Antigēnu preparātu sastāvā vienmēr ir daudz balasta vielu no dzīvnieku šūnām vai audu kultūrām, kas var arī izkropļot reakcijas rezultātus.

Iegūtie vīrusa antigēni tiek inaktivēti, tiek noteikta darba deva, kā arī antikomplementārās un hemolītiskās īpašības. Pēc tam antigēnu titrē komplementa klātbūtnē.

Otrais galvenais komponents reakcijas inscenēšanā ir komplements. Šis termins attiecas uz sarežģītu olbaltumvielu un faktoru sistēmu, kas atrodas dzīvnieku un cilvēku asinīs. Parasti komplementa fiksācijas reakcijā izmanto jūrascūciņu asins serumu. Komplementa aktivitāte (titrs) ir tā mazākais daudzums, kura klātbūtnē hemolizīns izraisa pilnu izmantotās hemolītiskās sistēmas hemolīzi.

Lai identificētu komplementu fiksējošās antivielas pret vīrusiem, serums ir jāinaktivē, lai 560C temperatūrā 30 minūtes likvidētu komplementu. Serumus no imunizētiem dzīvniekiem parasti izmanto kā atsauces serumus. Turklāt imunizācijai tiek izmantoti vīrusu antigēni, kas ir rūpīgi attīrīti no audu piemaisījumiem, jo ​​pretējā gadījumā notiek izteikta nespecifiska reakcija.

Komplementa saistīšanās reakcijas obligāta sastāvdaļa ir hemolītiskā sistēma, kurā ietilpst aitu eritrocīti un hemolītiskais serums, kas iegūts, trušus hiperimunizējot ar aitas eritrocītiem.

Komplementa saistīšanas reakcijas veikšanai tiek izmantotas šādas modifikācijas: komplementa saistīšanas reakcijas mikrometode Takachi sistēmas mikrotitratorā, ilgstoša komplementa saistīšanās reakcija, netiešā komplementa saistīšanās reakcija, komplementa saistīšanas reakcija gēlā, mikropiliens. komplementa saistīšanas reakcija, komplementa saistīšanās reakcija uz cietas bāzes.

Lai gan komplementa fiksācijas reakcijas jutība ir zema, tai ir augsta specifika. Šajā sakarā to plaši izmanto vīrusu pneimoenterīta diagnosticēšanai jaunlopiem.

Komplementa saistīšanās reakcija (CFR) ir tāda, ka tad, kad antigēni un antivielas atbilst viens otram, tie veido imūnkompleksu, kuram komplements (C) tiek piesaistīts caur antivielu Fc fragmentu, t.i., komplementu saista antigēna-antivielu komplekss. Ja antigēna-antivielu komplekss neveidojas, komplements paliek brīvs.

AG un AT specifisko mijiedarbību pavada komplementa adsorbcija (saistīšanās). Tā kā komplementa fiksācijas process nav vizuāli redzams, J. Bordet un O. Zhangu ierosināja izmantot hemolītisko sistēmu (aitas sarkanās asins šūnas + hemolītiskais serums) kā indikatoru, kas parāda, vai komplements ir fiksēts ar AG-AT kompleksu. Ja AG un AT atbilst viens otram, t.i., ir izveidojies imūnkomplekss, tad ar šo kompleksu saistās komplements un hemolīze nenotiek. Ja AT neatbilst AG, tad komplekss neveidojas un komplements, paliekot brīvs, savienojas ar otro sistēmu un izraisa hemolīzi.

Reakcijas gaita

Reakcija notiek divās fāzēs, iesaistot divas sistēmas; bakteriālas un hemolītiskas. Pirmā reakcija (specifiskā) ietver antigēnu 4-+ antivielu + komplementu. Pozitīvu reakcijas rezultātu, kas rodas, antivielām sakrītot ar antigēnu, raksturo specifiska baktēriju antigēna-antivielu kompleksa veidošanās ar adsorbētu jeb, kā saka, “saistītu” komplementu. Paliekot neredzams, komplekss neizraisa nekādas ārējas izmaiņas vidē, kurā tas veidojies. Negatīvs RSC rezultāts rodas, ja nav specifiskas afinitātes starp antigēnu un seruma antivielu, un to raksturo brīvā aktīvā komplementa saglabāšanās. Pirmo RSC fāzi var veikt termostatā 37°C (1-2 stundas) vai ledusskapī 3-4°C (18-20 stundas). Ilgstoši veidojoties antigēna-antivielu imūnkompleksam aukstumā, notiek pilnīgāka komplementa saistīšanās, un rezultātā palielinās reakcijas jutība. Veicot salīdzinošos eksperimentus, padomju imunologs akadēmiķis. V.Ioffe un viņa studenti parādīja, ka ilgstošas ​​komplementa fiksācijas apstākļos aukstumā ir iespējams uztvert 100-500 reižu mazāku antigēna daudzumu un iegūt pozitīvus rezultātus ar lielākiem imūnseruma atšķaidījumiem nekā komplementa saistīšanas eksperimentā pie temperatūras 37 ° C temperatūrā 1-2 stundas. Otrā reakcijas fāze (orientējoši) notiek starp hemolītiskās sistēmas reaģentiem (3% eritrocītu suspensijas un hemolītiskā seruma maisījums vienādos tilpumos) 37 ° C temperatūrā. tikai komplementa klātbūtnē, kas paliek brīvs no reakcijas pirmās fāzes (negatīva reakcija). Ja nav brīva aktīvā komplementa, sarkano asins šūnu hemolīze specifisku hemolizīnu ietekmē nenotiek (reakcija ir pozitīva).

Sastāvdaļas

Komplementa saistīšanās reakcija (CFR) ir komplekss seroloģiskās reakcijas. Lai to veiktu, ir nepieciešamas 5 sastāvdaļas, proti: AG, AT un komplements (pirmā sistēma), aitas eritrocīti un hemolītiskais serums (otrā sistēma).

CSC antigēns var būt dažādu nogalinātu mikroorganismu kultūras, to lizāti, baktēriju sastāvdaļas, patoloģiski izmainīti un normāli orgāni, audu lipīdi, vīrusi un vīrusus saturoši materiāli.

Kā papildinājumu izmanto svaigu vai kaltētu jūrascūciņu serumu.

Reakcijas mehānisms

RSK tiek veikts divās fāzēs: 1. fāze - maisījuma, kas satur trīs komponentus antigēns + antiviela + komplements, inkubācija; 2. fāze (indikators) - brīvā komplementa noteikšana maisījumā, pievienojot tam hemolītisko sistēmu, kas sastāv no aitu eritrocītiem un hemolītiskā seruma, kas satur antivielas pret tiem. Reakcijas 1.fāzē, veidojoties antigēna-antivielu kompleksam, saistās komplements, un tad 2.fāzē nenotiks ar antivielām sensibilizēto eritrocītu hemolīze; reakcija ir pozitīva. Ja antigēns un antiviela nesakrīt (pārbaudāmajā paraugā nav antigēna vai antivielas), komplements paliek brīvs un 2.fāzē pievienosies eritrocītu - antieritrocītu antivielu kompleksam, izraisot hemolīzi; reakcija ir negatīva.

Pieteikums

Komplementa fiksācijas reakciju var izmantot, lai:
1) specifisku antivielu identificēšana nezināmā serumā, pamatojoties uz to mijiedarbību ar zināma rakstura antigēnu;
2) antigēna īpašību izpēte reakcijā ar zināmu specifisku serumu. Sastāvdaļu sagatavošana RSC iestudēšanai.

1. Pētījumiem iegūto asins serumu reakcijas priekšvakarā 30 minūtes karsē ūdens vannā 56°C, lai inaktivētu savu komplementu. Inaktivētu serumu var uzglabāt 3-4°C temperatūrā 5-6 dienas. Eksperimenta dienā serumu atšķaida ar izotoniskā nātrija hlorīda šķīdumu attiecībā 1:5 (0,1 ml testa seruma + 0,4 ml izotoniskā nātrija hlorīda šķīduma).

2. Antigēns CSC ražošanai var būt dažādu mikrobu kultūras, baktēriju proteīni un ekstrakti, kas iegūti no mikrobu kultūrām, patoloģiski izmainītiem un normāliem orgāniem un audiem. Antigēna sagatavošanas specifiku nosaka infekcijas procesa raksturs un tā patogēna īpašības.

3. Komplements ir serumu maisījums, kas iegūts no 3-5 veselām jūrascūciņām, vai sausais komplements ampulās.

Tieši pirms lietošanas jūrascūciņu serumu atšķaida ar izotonisku nātrija hlorīda šķīdumu attiecībā 1:10, lai iegūtu izejas šķīdumu.

4. Pirms eksperimenta veikšanas hemolītisko serumu inaktivē, karsējot 56 °C temperatūrā 30 minūtes. Lai veiktu galveno RSC eksperimentu, kā arī titrētu komplementu un antigēnu, hemolītisko serumu izmanto trīskāršā titrā. Piemēram, ja hemolītiskā seruma titrs ir 1:1800, reakcijā izmanto seruma atšķaidījumu 1:600.

5. Eritrocītus iegūst no defibrinētām aitas asinīm. Lai noņemtu fibrīna plēves, asinis filtrē caur trīsslāņu marles filtru. Iegūto filtrātu centrifugē, serumu atsūc un notecina, un eritrocītus mazgā, 3-4 reizes centrifugējot ar izotonisku nātrija hlorīda šķīdumu. Kad sarkanās asins šūnas tiek mazgātas pēdējo reizi, šķidruma supernatantam jābūt pilnīgi caurspīdīgam. 3% suspensiju pagatavo no mazgātām sarkanajām asins šūnām izotoniskā nātrija hlorīda šķīdumā. Sagatavojot RSC iesaistītās sastāvdaļas iepriekšminētajā veidā, pārejiet pie hemolītiskā seruma, komplementa un antigēna titrēšanas.

61. Reakcijas, kas ietver komplementu. Komplementa fiksācijas reakcija. Mehānisms, sastāvdaļas, uzstādīšanas metodes, pielietojums. Radiālās hemolīzes reakcija

Reakcijas, kas ietver komplementu

Reakcijas, kas ietver komplementupamatojoties uz komplementa aktivāciju ar antigēna-antivielu kompleksu (komplementa fiksācijas reakcija, radiālā hemolīze utt.).

Komplementa fiksācijas reakcija (RSK) ir tas, ka tad, kad antigēni un antivielas atbilst viens otram, tie veido imūnkompleksu, kuram caur Fc -antivielas fragments ir pievienots komplementam (C), t.i., komplementu saista antigēna-antivielu komplekss. Ja antigēna-antivielu komplekss neveidojas, tad komplements paliek brīvs (13.8. att.). RSK tiek veikts divās fāzēs: 1. fāze - maisījuma, kas satur trīs komponentus antigēns + antiviela + komplements, inkubācija; 2. fāze (indikators) - brīvā komplementa noteikšana maisījumā, pievienojot tam hemolītisko sistēmu, kas sastāv no aitu eritrocītiem un hemolītiskā seruma, kas satur antivielas pret tiem. Reakcijas 1.fāzē, veidojoties antigēna-antivielu kompleksam, saistās komplements, un tad 2.fāzē nenotiks ar antivielām sensibilizēto eritrocītu hemolīze; reakcija ir pozitīva. Ja antigēns un antiviela nesakrīt (pārbaudāmajā paraugā nav antigēna vai antivielas), komplements paliek brīvs un 2.fāzē pievienosies eritrocītu - antieritrocītu antivielu kompleksam, izraisot hemolīzi; reakcija ir negatīva.

RSC izmanto, lai diagnosticētu daudzas infekcijas slimības, jo īpaši sifilisu (Wassermann reakcija).

Šo reakciju izmanto, lai noteiktu antivielas asins serumā pacientiem ar bakteriālām, vīrusu, vienšūņu infekcijām, kā arī identificētu un tipizētu no pacientiem izolētus vīrusus. RSC attiecas uz sarežģītām seroloģiskām reakcijām, kurās bez antigēna, antivielas un komplementa piedalās arī hemolītiskā sistēma, atklājot reakcijas rezultātus. RSC notiek divās fāzēs: pirmā ir antigēna mijiedarbība ar antivielu, piedaloties komplementam, un otrā ir komplementa saistīšanās pakāpes noteikšana, izmantojot hemolītisko sistēmu. Šī sistēma sastāv no aitas sarkanajām asins šūnām un hemolītiskā seruma, kas iegūts, imunizējot laboratorijas dzīvniekus ar sarkanajām asins šūnām. Eritrocīti tiek apstrādāti – sensibilizēti, pievienojot tiem serumu 37°C temperatūrā 30 minūtes. Sensibilizēto aitu eritrocītu līze notiek tikai tad, ja tie pievienojas hemolītiskā komplementa sistēmai. Ja tā nav, sarkanās asins šūnas nemainās. RSC rezultāti ir atkarīgi no antivielu klātbūtnes testa serumā. Ja serumā ir antivielas, kas ir homologas reakcijā izmantotajam antigēnam, tad iegūtais antigēna-antivielu komplekss saista un saista komplementu. Pievienojot hemolītisko sistēmu, šajā gadījumā hemolīze nenotiks, jo viss komplements tiek tērēts specifiskam antigēna-antivielu kompleksa savienojumam. Sarkanās asins šūnas paliek nemainīgas, tāpēc hemolīzes neesamība mēģenē tiek reģistrēta kā pozitīvs RBC. Ja serumā nav antigēnam atbilstošu antivielu, specifisks antigēna-antivielu komplekss neveidojas un komplements paliek brīvs. Kad tiek pievienota hemolītiskā sistēma, tai pievienojas komplements un izraisa sarkano asins šūnu hemolīzi. Sarkano asins šūnu iznīcināšana un to hemolīze raksturo negatīvu reakciju.

RSC stadijai nepieciešams: pacienta serums, komplements, hemolītiskā sistēma, kas sastāv no aitas eritrocītiem un hemolītiskā seruma, kā arī izotonisks nātrija hlorīda šķīdums. Reakciju veic seroloģiskās mēģenēs. Aitu sarkanās asins šūnas tiek iegūtas no defibrinētām aitu asinīm, trīs reizes mazgājot tās ar izotonisku nātrija hlorīda šķīdumu. Hemolītisko serumu ražo jau gatavu ampulās, uz kuru etiķetes ir norādīts tā titrs, t.i., maksimālais seruma atšķaidījums, kas, pievienojot sarkanajām asins šūnām komplementa klātbūtnē, tomēr izraisa hemolīzi. Hemolītisko serumu iegūst, imunizējot dzīvniekus, piemēram, trušus, ar aitas sarkanajām asins šūnām. Iestatot reakciju, serumu izmanto trīskāršā titrā. Piemēram, hemolītiskā seruma titrs ir 1:1200, un darba atšķaidījums ir 1:400. Kā komplementu izmanto svaigu jūrascūciņu asins serumu (24-48 stundu laikā) vai sauso komplementu ampulās. Pirms RSC veikšanas komplementu atšķaida attiecībā 1:10 un titrē, lai noteiktu titru – mazāko komplementa daudzumu, kas rodas sarkano asins šūnu hemolīzes rezultātā, apvienojot to ar šajā reakcijā izmantoto hemolītisko sistēmu. Ņemot vērā antigēna iespējamās anti-komplementārās īpašības, veicot reakciju, noteiktais komplementa darba titrs tiek palielināts par 20-30%.
RSC antigēns ir nogalinātu baktēriju suspensijas, ekstrakti, kas pagatavoti no šīm suspensijām, un atsevišķas mikrobu ķīmiskās frakcijas. Galvenā prasība pēc antigēna ir komplementa aktivitātes inhibīcijas trūkums. Tam nevajadzētu būt komplementārām īpašībām. Lai identificētu šīs antigēna īpašības, komplements tiek papildus titrēts reakcijā izmantotā antigēna klātbūtnē. Ir noteiktas shēmas RSC iestudēšanai. Reakcijas rezultāti tiek ņemti vērā, ņemot vērā sarkano asins šūnu hemolīzes esamību vai neesamību hemolītiskajā sistēmā. RSC izmanto sifilisa (Wassermann reakcija), gonorejas (Bordet-Gengou reakcija), toksoplazmozes, riketsijas un vīrusu slimību diagnostikā.

Radiālās hemolīzes reakcija (RRH) ) ievieto agara gela iedobēs, kas satur aitas sarkanās asins šūnas un komplementu. Pēc hemolītiskā seruma (antivielas pret aitu sarkanajām asins šūnām) ievadīšanas gēla iedobēs ap tām veidojas hemolīzes zona (antivielu radiālās difūzijas rezultātā). Tādā veidā ir iespējams noteikt komplementa un hemolītiskā seruma aktivitāti, kā arī antivielas asins serumā pacientiem ar gripu, masaliņām, ērču encefalītu. Lai to izdarītu, attiecīgie vīrusa antigēni tiek adsorbēti uz eritrocītiem, un pacienta asins serums tiek pievienots gēla iedobēm, kas satur šos eritrocītus. Pretvīrusu antivielas mijiedarbojas ar vīrusu antigēniem, kas adsorbēti uz eritrocītiem, pēc tam komplementa komponenti pievienojas šim kompleksam, izraisot hemolīzi.