(RSK) - serol. tamamlayıcı fiksasiya edən Abs və Ag-lərin kəmiyyətcə təyini üçün istifadə olunan reaksiya. RSC-nin prinsipi ondan ibarətdir ki, spesifik immun kompleks sistemə əlavə olunan C-ni tamamilə və ya qismən adsorbsiya edir.. Bağlanmanın kəmiyyət göstəricisi kimi C qəbul edilir. hemolitik sistem hemoliz nümunəsi diaqnostik sistemdə immun kompleksinin olmamasını göstərir (mənfi RSC), gecikmiş hemoliz - immun kompleksinin olması səbəbindən (müsbət RSC). RSK-da istifadə edirlər: 1) 57 ° C-də 30 dəqiqə qızdırılır. s-ku, təzə olmalıdır, dayandırılmış hissəciklər, sitotoksinlər olmadan, C. Təcrübə adətən şübhəli xəstəlik üçün CSC-nin diaqnostik titrindən asılı olaraq s-ki-nin 2 qatılmasının bir neçə qatını alır; 2) satış üçün və ya RSK üçün xüsusi hazırlanmış diaqnostikum; 3) işçi dozada C, Ag ilə titrləndikdə kənarlar C titrinə bərabərdir, Ag olmadan titr edildikdə isə C titrindən 20 - 25% yüksəkdir; 4) qoyun eritrositləri bir neçə dəfə şoran məhlulla yuyulur və 3%-li suspenziya hazırlanır; 5) hemolitik turşu etiketdə göstərilən titrdən 3 dəfə az seyreltilir. Bütün 5 komponent eyni həcmdə (0,5 ml və ya 0,25 ml) alınır. Tədqiqat eksperimental (diaqnostik) sistemə daxil edilir. s-ku, diagnosticum, S. Nəzarət vasitələri hazırlayın: s-ki - s-ku, S və şoran məhlulu (Ag əvəzinə); diagnosticum - diagnosticum, S və salin (s-ki əvəzinə); C-C və ikiqat həcmdə şoran; açıq-aydın müsbət - standart immun sistemi, Ag, C; açıq-aydın mənfi - normal s-ka, Ag, C. Sınaq boruları sarsılır və 45 dəqiqə ərzində 37 ° C-də bir termostata yerləşdirilir. Eyni zamanda, qoyun eritrositlərinin və hemolitik sistemin bərabər həcmdə 3% suspenziyasını qarışdıraraq hemolitik sistem hazırlayın və eyni vaxtda termostatda inkubasiya edin. Sensibilizasiyadan sonra bütün sınaq və nəzarət borularına hemolitik sistemin ikiqat həcmi (1 ml və ya 0,5 ml) əlavə edilir. Bütün borular nəzarət borularında tam hemoliz baş verənə qədər (təxminən 30-40 dəqiqə) 37°C-də termostatda saxlanılır. Reaksiyanı təyin etməyin kəmiyyət üsulu ilə hemolizdə ən azı 2+ gecikmənin olduğu bir seyreltmə tapırlar (Tədqiq olunan titrdə) və onu tanınan xəstəliyin diaqnostik titri ilə müqayisə edirlər. Dərmanın bir seyreltilməsi ilə (adətən 1:5) yarı kəmiyyət metodu hemoliz ləngiməsinin dərəcəsini 4+, 3+, 2+ təyin etməyə və buna əsaslanaraq reaksiyanın intensivliyini qiymətləndirməyə imkan verir. Daha dəqiq nəticələr titri 100% deyil, 50% hemoliz əsasında tapmaqla əldə edilir (bax. tamamlayıcı tərif). RSC-nin kəmiyyət formulunun bir variantı təklif edilmişdir, burada onlar dərmanın bir seyreltilməsini qəbul edirlər, lakin bir neçə dozada C (1; 1,5; 2; 2,5; 3; 4). Bütün digər komponentlər eyni miqdarda istifadə olunur. Qiymətləndirərkən nəzərə alırlar ki, nə daha çox doza C tədqiqatı birləşdirir. s-ka, daha çox At it var.

(Mənbə: Mikrobiologiya terminləri lüğəti)

Digər lüğətlərdə "Tamamlayıcı fiksasiya reaksiyası" nın nə olduğuna baxın:

tamamlayıcı fiksasiya reaksiyası- RSK Laboratoriya üsulu. [Vaksinologiya və immunizasiyada əsas terminlərin ingiliscə-rusca lüğəti. Ümumdünya Səhiyyə Təşkilatı, 2009] Mövzular vaksinologiya, immunizasiya RSC EN-nin sinonimləri tamamlayıcı fiksasiya testiCFTCF testi ... Texniki Tərcüməçi Bələdçisi

TAMAMLAYICI FIXASYON REAKSİYASI- tamamlayıcı fiksasiya reaksiyası, RSK, Bordet-Zhangu reaksiyası [Belçikanın adını daşıyır. bakterioloqlar J. Bordet və O. Gengou, 1901], kompleksin mülkiyyətinə əsaslanan yüksək spesifik və çox həssas seroloji reaksiya... ... Baytarlıq ensiklopedik lüğəti

I Komplementin fiksasiya reaksiyası antigen-antikor kompleksləri ilə komplementin istehlakının (fiksasiyasının) qiymətləndirilməsi əsasında antigen və ya antikor təyin etmək üçün istifadə edilən seroloji reaksiyadır, immunoloji tədqiqat metodlarına baxın. II...... Tibbi ensiklopediya

tamamlayıcı fiksasiya reaksiyası

tamamlayıcı fiksasiya reaksiyası- (RSK), bir çox yoluxucu və invaziv heyvan xəstəliklərinin diaqnozu üçün istifadə olunan yüksək həssas və spesifik seroloji reaksiya. Ardıcıl iki mərhələdən ibarətdir. Birinci mərhələdə antigen test serumu ilə qarışdırılır və...... Kənd təsərrüfatı. Böyük ensiklopedik lüğət

- (RSK; sinonimi: Bordet Zhangu reaksiyası, tamamlayıcı rədd reaksiyası köhnəlmişdir, aleksin fiksasiya reaksiyası köhnəlmişdir) metodu seroloji tədqiqat, aşkar edilən antigen-antikor kompleksinin komplementi bağlamaq qabiliyyətinə əsaslanır... ... Böyük tibbi lüğət

TAMAMLAYICI FIXASYON REAKSİYASI (FFR)- yüksək həssas və spesifik. seroloji cəmliyə diaqnoz qoymaq üçün istifadə olunan reaksiya. yoluxucu və qadınların invaziv xəstəlikləri. İki ardıcıldan ibarətdir. mərhələləri Birinci mərhələdə antigen test zərdabı və tamamlayıcı (zülallar kompleksi... ...) ilə qarışdırılır. Kənd təsərrüfatı ensiklopedik lüğəti

- (köhnəlmiş) bax Komplement fiksasiya reaksiyası... Böyük tibbi lüğət

komplementin rədd edilməsi reaksiyası- rus reaksiyası (g) tamamlayıcı fiksasiya, reaksiya (g) Bordet Zhangou; reaksiya (g) komplementin rədd edilməsi; aleksin fiksasiya reaksiyası (g) tamamlayıcı fiksasiya testi fra reaksiya (f) de fiksasiya du tamamlama deu Komplementbindungsreaksiya (f) spa… … Əməyin mühafizəsi və təhlükəsizliyi. İngilis, Fransız, Alman, İspan dillərinə tərcümə

Baxın Komplement fiksasiya reaksiyası. (

Hemoliz reaksiyası.

Hemoliz reaksiyası (HR) - Bu, tamamlayıcının iştirakı ilə antikorların təsiri ilə qırmızı qan hüceyrələrinin məhv edilməsidir.

RG komponentləri.

1. Antigen- izotonik natrium xlorid məhlulunda qırmızı qan hüceyrələrinin 3% suspenziyası;

2. Antikor - hemolitik serum- serum tərkibli qırmızı qan hüceyrələrinə qarşı antikorlar (hemolizinlər); serum dovşanları qoyun eritrositləri ilə immunizasiya etməklə əldə edilir;

3. tamamlayıcı– antigen-antikor kompleksinə adsorbsiya edən və antigeni məhv edən membran hücum kompleksi yaradan qan zülalları sistemi, yəni. qırmızı qan hüceyrələrini məhv edir və ya başqa sözlə qırmızı qan hüceyrələrinin parçalanmasına səbəb olur ( hemoliz). Təzə hazırlanmışdır Qvineya donuzunun qan serumu.

Əgər qırmızı qan hüceyrələri, hemolitik zərdab və komplement müəyyən miqdarda sınaq borusuna yerləşdirilirsə, bir neçə dəqiqə ərzində qırmızı qan hüceyrələrinin məhv edilməsi (hemoliz) baş verəcək, nəticədə tünd qırmızıdan olan qarışıq çəhrayı rəngə çevriləcəkdir. ("lak qan").

Hemoliz reaksiyası komplementin fiksasiyası reaksiyasını yerinə yetirərkən göstərici kimi istifadə olunur.

Komplement fiksasiya reaksiyası (CFR) 2 antigen-antikor və komplement sistemini əhatə edən mürəkkəb seroloji reaksiyadır. 1-ci sistem - spesifik, 2-ci - hemolitik sistemi.

Bu reaksiya antigen-antikor kompleksinin formalaşması zamanı komplementin bu kompleksə bağlandığını müəyyən edən J. Bordet və O. Zhangou tərəfindən hazırlanmışdır. Görünən effekt harada görünmür, buna görə də, komplementin bağlanmasını aşkar etmək (və nəticədə, bir-birinə uyğun olduqda antigen-antikor kompleksinin meydana gəlməsini aşkar etmək), yəni. kimi göstəriciİkinci üsul istifadə olunur - hemolitik sistem.

RSC daha tez-tez serodiaqnoz (xəstənin qan zərdabında patogenə qarşı anticisimlərin aşkarlanması) üçün istifadə olunur. ) qonoreya, sifilis, göy öskürək, tif və digər rikketsiozlar və bir çox virus xəstəlikləri. RSC də seroidifikasiya üçün istifadə olunur.

RSK komponentləri.

1. Antigen– mikrob ekstraktları, haptenlər, daha az tez-tez – mikrobların suspenziyası, yəni. antigen ya korpuskulyar (həll olmayan) və ya molekulyar (həll olan) ola bilər.

2 . Antikor– xəstənin qan serumu (serodiaqnoz üçün) və ya immun diaqnostik serum, tərkibində məlum antikorlar (seroidləşdirildikdə).

3. Qoyun qırmızı qan hüceyrələri – antigenlər hemolitik reaksiya.

4. Hemolitik serum- serum tərkibli antikorlar qoyun eritrositlərinə. Serum almaq bir dovşanı qoyun eritrositləri ilə immunizasiya etməklə.

5. tamamlayıcı– təzə hazırlanmış Qvineya donuzunun qan serumu (maye və ya dondurulmuş qurudulmuş).

6. Elektrolit – izotonik məhlul natrium xlor.

RSK tərəfindən hazırlanmışdır.

Təcrübədən əvvəl antigen, xəstə serumu, hemolitik zərdab və komplement titrlənir (onların titri müəyyən edilir). Xəstənin serumu 30 dəqiqə ərzində 56°C-də qızdırılır.

RSK-da həyata keçirilir 2 faza.

I mərhələ - spesifik: bir probirkada spesifik sistem hazırlanır - bərabər miqdarda məlum antigen, xəstə zərdab və komplement qarışdırılır, başqa bir sınaq borusunda hemolitik sistem hazırlanır - qoyun eritrositləri ilə hemolitik zərdab qarışığı, borular bir yerə qoyulur. 30 dəqiqə 37 ° C-də termostat. Eyni zamanda, antigen, komplement və hemosistem üçün nəzarətlər, məlum xəstə (müsbət serum) və məlum sağlam şəxsin (mənfi zərdab) serumu ilə nəzarət nümunələri hazırlanır və həmçinin 30 dəqiqə ərzində termostata yerləşdirilir.

II mərhələ - göstərici: ilkin qarışığa və bütün tənzimləyici borulara bərabər miqdarda hemolitik sistem əlavə edilir və 30 dəqiqə termostatda saxlandıqdan sonra reaksiyanın nəticələri nəzərə alınır.

DSC nəticələrinin uçotu nəzarətdə mükəmməl nəticələrlə həyata keçirilir .

Müsbət reaksiya(insan xəstədir və onun zərdabında xəstəliyin törədicisi - antigenə müvafiq antikorlar var): I mərhələdə komplementin bağlandığı xüsusi sistemdə antigen-antikor kompleksləri əmələ gəlir; hemolitik sistem əlavə edildikdən sonra II fazada hemoliz müşahidə edilmir, çünki komplement 1-ci xüsusi sistemlə bağlıdır. Görünən effekt- təhsil eritrosit çöküntüsü.

Mənfi reaksiya(insan sağlamdır və onun zərdabında törədici agentə anticisim yoxdur): antigen-antikor kompleksləri əmələ gəlmir və I fazada komplement sərbəst qalır; II fazada hemolitik sistemi əlavə etdikdən sonra komplement antigen-antikorla birləşir. burada mütləq mövcud olan komplekslər (bunlar eritrosit-antikor kompleksləridir) anti-eritrosit anticisimləridir) və qırmızı qan hüceyrələrinin hemolizinə səbəb olur. Görünən effekt- qırmızı qan hüceyrələrinin hemolizi; "lak qan"

Diaqnostikada yoluxucu xəstəliklər də istifadə olunur toksinin antitoksik serum ilə neytrallaşdırılması reaksiyası (RN)., immunofluoressensiya reaksiyası (RIF), radioimmunoassay (RIA), fermentlə əlaqəli immunosorbent analizi (ELISA).

Tamamlayıcı fiksasiya testi bir çox viral xəstəliklərin diaqnostikası üçün istifadə edilən ənənəvi seroloji testlərdən biridir və həmçinin antiviral antikorların aşkarlanması üçün bəzi digər üsulların əsasını təşkil edir. Həssaslıqda neytrallaşma reaksiyası, hemaqlütinasiyanın inhibisyonu, dolayı hemaqlütinasiya və ferment immunoassay komplementlərin fiksasiya reaksiyasından üstün olsa da, texnikanın sadəliyi, anticisimlərin erkən aşkarlanması, həmçinin hemaqlütinasiya xüsusiyyətinə malik olmayan viral antigenlərin müəyyən edilməsi izah edir. virusoloji tədqiqatlarda geniş istifadə olunur.

Onun istehsalı bir sıra digər immunoloji reaksiyalar üçün zəruri olan antigenik dərmanların belə yüksək konsentrasiyası və saflığını tələb etmir. Bundan əlavə, bir çox virusların tamamlayıcı fiksasiya edən antigenlərinin qrup spesifikliyi komplementin fiksasiya reaksiyasından kütləvi diaqnostikada istifadə etməyə imkan verir: bu reaksiya deformasiya fərqlərini aşkar etmir və viruslar arasında antigen əlaqələrini öyrənərkən xüsusi əhəmiyyət kəsb edir.

Adın özü əsasən iki ayrı reaksiyadan ibarət olan metodun mahiyyətini əks etdirir. Birinci mərhələdə reaksiya antigenləri və antikorları (bu komponentlərdən biri əvvəlcədən məlumdur), həmçinin titrlənmiş miqdarda tamamlayır. Antigen və antikorlar uyğun gələrsə, onların kompleksi tamamlayır, ikinci mərhələdə göstərici sistemindən (qoyun qırmızı qan hüceyrələrinin və onlara antiserumun qarışığı) istifadə edərək aşkar edilir. Komplement antigen və antikorların qarşılıqlı təsiri ilə bağlıdırsa, qoyun qırmızı qan hüceyrələrinin lizisi baş vermir (müsbət komplement fiksasiya reaksiyası). At mənfi reaksiya Komplementin fiksasiyası, bağlanmamış tamamlayıcı hemolizi təşviq edir, bunun vasitəsilə reaksiyanın nəticələri mühakimə olunur.

Komplementin fiksasiya reaksiyasının əsas komponentləri antigenlər (məlum və ya aşkar edilə bilən), antikorlar (məlum antiserum və ya test seraları), komplement, hemolitik zərdab və qoyun qırmızı qan hüceyrələridir; Seyreltici olaraq izotonik natrium xlorid məhlulu (pH 7,2-7,4) və ya müxtəlif tampon məhlulları istifadə olunur. Antigenlər və sera anti-tamamlayıcı ola bilər, yəni. hemolizi gecikdirən və reaksiyanın nəticəsini təhrif edən tamamlayıcı adsorbsiya qabiliyyəti.

CSC üçün antigenlər yoluxmuş heyvanların orqanlarından, yoluxmuş toyuq embrionlarının allantoik və ya amniotik mayesindən, həmçinin toxuma hüceyrə kulturalarında virusların becərilməsindən sonra mədəniyyət mayesindən hazırlanır. Antigenik preparatlar həmişə heyvan hüceyrələrindən və ya toxuma mədəniyyətlərindən çoxlu balast maddələrini ehtiva edir ki, bu da reaksiyanın nəticələrini təhrif edə bilər.

Yaranan viral antigenlər təsirsiz hala gətirilir, iş dozası, həmçinin anti-tamamlayıcı və hemolitik xüsusiyyətlər müəyyən edilir. Sonra antigen komplementin iştirakı ilə titrlənir.

Reaksiyanı təşkil edən ikinci əsas komponent tamamlayıcıdır. Bu termin heyvanların və insanların qanında mövcud olan mürəkkəb zülallar və amillər sisteminə aiddir. Tipik olaraq, tamamlayıcı fiksasiya reaksiyasında qvineya donuzunun qan serumu istifadə olunur. Komplementin aktivliyi (titeri) onun ən kiçik miqdarıdır, onun iştirakı ilə hemolizin istifadə olunan hemolitik sistemin tam hemolizinə səbəb olur.

Viruslara qarşı komplement fiksasiya edən anticisimləri müəyyən etmək üçün 560C-də 30 dəqiqə ərzində komplemanı aradan qaldırmaq üçün serumun inaktivləşdirilməsi tələb olunur. İmmunlaşdırılmış heyvanların seraları adətən istinad seraları kimi istifadə olunur. Bundan əlavə, immunizasiya üçün toxuma çirklərindən hərtərəfli təmizlənmiş viral antigenlər istifadə olunur, çünki əks halda açıq bir qeyri-spesifik reaksiya meydana gəlir.

Komplement fiksasiya reaksiyasının məcburi komponenti qoyun eritrositləri və dovşanların qoyun eritrositləri ilə hiperimmunizasiyası nəticəsində əldə edilən hemolitik zərdabın daxil olduğu hemolitik sistemdir.

Komplementin fiksasiya reaksiyasını yerinə yetirmək üçün aşağıdakı modifikasiyalardan istifadə olunur: Takachi sistem mikrotitratorunda komplementin fiksasiya reaksiyasının mikrometodu, komplementin uzunmüddətli fiksasiyası reaksiyası, dolayı komplementin fiksasiyası reaksiyası, geldə tamamlayıcı fiksasiya reaksiyası, mikrodamcı. tamamlayıcı fiksasiya reaksiyası, bərk əsaslı tamamlayıcı fiksasiya reaksiyası.

Komplement fiksasiya reaksiyasının həssaslığı aşağı olsa da, yüksək spesifikliyə malikdir. Bu baxımdan cavan mal-qaralarda viral pnevmoenteritlərin diaqnostikasında geniş istifadə olunur.

Komplementin fiksasiya reaksiyası (CFR) ondan ibarətdir ki, antigenlər və antikorlar bir-birinə uyğun gələndə, antikorların Fc fraqmenti vasitəsilə tamamlayıcı (C) birləşən, yəni komplement antigen-antikor kompleksi ilə bağlanan bir immun kompleks əmələ gətirir. Antigen-antikor kompleksi əmələ gəlməzsə, komplement sərbəst qalır.

AG və AT-nin spesifik qarşılıqlı təsiri komplementin adsorbsiya (bağlanması) ilə müşayiət olunur. Komplementin fiksasiyası prosesi vizual olaraq görünmədiyi üçün J. Bordet və O. Zhangu hemolitik sistemin (qoyun qırmızı qan hüceyrələri + hemolitik zərdab) indikator kimi istifadəsini təklif etdilər, bu da tamamlayıcının AG-AT kompleksi ilə sabitləşdiyini göstərir. Əgər AG və AT bir-birinə uyğundursa, yəni immun kompleks əmələ gəlibsə, onda komplement bu komplekslə birləşir və hemoliz baş vermir. Əgər AT AG-yə uyğun gəlmirsə, onda kompleks əmələ gəlmir və tamamlayır, sərbəst qalır, ikinci sistemlə birləşir və hemolizə səbəb olur.

Reaksiya irəliləyişi

Reaksiya iki sistemi əhatə edən iki mərhələdə baş verir; bakterial və hemolitik. Birinci reaksiya (spesifik) antigen 4-+ antikor + komplementi əhatə edir. Antikorlar bir antigenlə uyğunlaşdıqda meydana gələn müsbət reaksiya nəticəsi, adsorbsiya edilmiş və ya necə deyərlər, "bağlanmış" tamamlayıcı ilə xüsusi bir bakterial antigen-antikor kompleksinin meydana gəlməsi ilə xarakterizə olunur. Görünməz olaraq qalan kompleks, formalaşdığı mühitdə heç bir xarici dəyişikliyə səbəb olmur. Mənfi RSC nəticəsi antigen və serum antikor arasında xüsusi yaxınlıq olmadıqda baş verir və sərbəst aktiv komplementin saxlanması ilə xarakterizə olunur. RSC-nin birinci mərhələsi termostatda 37°C-də (1-2 saat) və ya soyuducuda 3-4°C-də (18-20 saat) həyata keçirilə bilər. Soyuqda antigen-antikor immun kompleksinin uzun müddət formalaşması ilə komplementin daha tam bağlanması baş verir və nəticədə reaksiyanın həssaslığı artır. Müqayisəli təcrübələr apararkən Sovet immunoloqu Akademik. V.İ.İoffe və tələbələri göstərmişlər ki, soyuqda komplementin uzun müddət fiksasiyası şəraitində 100-500 dəfə az miqdarda antigen tutmaq və immun zərdabın daha çox seyreltilməsi ilə müsbət nəticələr əldə etmək olar 37 ° C-də 1-2 saat ərzində reaksiyanın ikinci mərhələsi (göstərici) hemolitik sistemin reagentləri (bərabər həcmdə eritrositlərin 3% suspenziyası və hemolitik serum qarışığı) 37 ° C temperaturda baş verir. yalnız reaksiyanın birinci mərhələsindən azad qalan tamamlayıcının iştirakı ilə (mənfi reaksiya) . Sərbəst aktiv komplement olmadıqda, xüsusi hemolizinlərin təsiri altında qırmızı qan hüceyrələrinin hemolizi baş vermir (reaksiya müsbətdir).

Komponentlər

Komplement fiksasiya reaksiyası (CFR) mürəkkəb seroloji reaksiyadır. Onu həyata keçirmək üçün 5 inqrediyent lazımdır, yəni: AG, AT və komplement (birinci sistem), qoyun eritrositləri və hemolitik serum (ikinci sistem).

CSC üçün antigen müxtəlif öldürülmüş mikroorqanizmlərin mədəniyyətləri, onların lizatları, bakteriyaların komponentləri, patoloji olaraq dəyişdirilmiş və normal orqanlar, toxuma lipidləri, viruslar və virus tərkibli materiallar ola bilər.

Tamamlayıcı olaraq təzə və ya qurudulmuş qvineya donuzu serumu istifadə olunur.

Reaksiya mexanizmi

RSK iki mərhələdə həyata keçirilir: 1-ci faza - antigen + antikor + tamamlayıcı üç komponentdən ibarət qarışığın inkubasiyası; 2-ci faza (göstərici) - qarışığa qoyun eritrositlərindən ibarət hemolitik sistem və onlara qarşı anticisimlər olan hemolitik zərdab əlavə etməklə sərbəst komplementin aşkarlanması. Reaksiyanın 1-ci fazasında antigen-antikor kompleksi əmələ gəldikdə komplement birləşir, sonra 2-ci fazada anticisimlərlə sensibilləşmiş eritrositlərin hemolizi baş verməyəcək; reaksiya müsbətdir. Antigen və antikor bir-birinə uyğun gəlmirsə (sınaq nümunəsində antigen və ya antikor yoxdur), komplement sərbəst qalır və 2-ci fazada eritrosit - anti-eritrosit anticisim kompleksinə qoşularaq hemolizə səbəb olur; reaksiya mənfi olur.

Ərizə

Komplement fiksasiya reaksiyası aşağıdakılar üçün istifadə edilə bilər:
1) naməlum zərdabda spesifik anticisimlərin məlum təbiətli antigenlə qarşılıqlı təsiri əsasında müəyyən edilməsi;
2) məlum spesifik serum ilə reaksiyada antigenin xassələrinin öyrənilməsi. RSC-nin səhnələşdirilməsi üçün inqrediyentlərin hazırlanması.

1. Tədqiqat üçün alınan qan zərdabı, reaksiya ərəfəsində, öz tamamlayıcısını təsirsiz hala gətirmək üçün su banyosunda 56 ° C-də 30 dəqiqə qızdırılır. İnaktivləşdirilmiş serum 3-4°C temperaturda 5-6 gün saxlanıla bilər. Təcrübə günü serum 1:5 nisbətində izotonik natrium xlorid məhlulu ilə seyreltilir (0,1 ml sınaq serumu + 0,4 ml izotonik natrium xlorid məhlulu).

2. CSC istehsalı üçün antigen müxtəlif mikrobların mədəniyyətləri, bakterial zülallar və mikrob kulturalarından alınan ekstraktlar, patoloji olaraq dəyişdirilmiş və normal orqan və toxumalar ola bilər. Antigenin hazırlanmasının xüsusiyyətləri yoluxucu prosesin təbiəti və onun patogeninin xüsusiyyətləri ilə müəyyən edilir.

3. Komplement 3-5 sağlam qvineya donuzundan alınan zərdabların qarışığı və ya ampulalarda quru komplementdir.

İstifadədən dərhal əvvəl, qvineya donuzunun serumu ehtiyat məhlulu əldə etmək üçün 1:10 nisbətində natrium xloridin izotonik bir həlli ilə seyreltilir.

4. Təcrübəni yerinə yetirməzdən əvvəl hemolitik zərdab 30 dəqiqə ərzində 56 °C temperaturda qızdırılaraq təsirsiz hala gətirilir. Əsas RSC təcrübəsini yerinə yetirmək üçün, həmçinin komplement və antigeni titr etmək üçün üçlü titrdə hemolitik zərdab istifadə olunur. Məsələn, hemolitik serumun titri 1: 1800 olarsa, reaksiyada 1: 600 zərdabın seyreltilməsi istifadə olunur.

5. Eritrositlər defibrinləşdirilmiş qoyun qanından alınır. Fibrin filmlərini çıxarmaq üçün qan üç qatlı cuna filtrindən süzülür. Yaranan filtrat sentrifuqalanır, zərdab sorulur və drenaj edilir və eritrositlər natrium xloridin izotonik məhlulu ilə 3-4 dəfə sentrifuqa edilərək yuyulur. Qırmızı qan hüceyrələri son dəfə yuyulduqda, mayenin supernatant təbəqəsi tamamilə şəffaf olmalıdır. İzotonik natrium xlorid məhlulunda yuyulmuş qırmızı qan hüceyrələrindən 3% suspenziya hazırlanır. RSC-də iştirak edən inqrediyentləri yuxarıda göstərilən qaydada hazırladıqdan sonra hemolitik zərdabın, komplementin və antigenin titrlənməsinə keçin.

61. Komplementin iştirak etdiyi reaksiyalar. Komplementin fiksasiya reaksiyası. Mexanizm, komponentlər, quraşdırma üsulları, tətbiqi. Radial hemoliz reaksiyası

Komplementin iştirak etdiyi reaksiyalar

Komplementin iştirak etdiyi reaksiyalarkomplementin antigen-antikor kompleksi tərəfindən aktivləşdirilməsinə əsaslanır (komplemanın fiksasiya reaksiyası, radial hemoliz və s.).

Komplementin fiksasiya reaksiyası (RSK) antigenlər və antikorlar bir-birinə uyğun olduqda, bir immun kompleksi meydana gətirirlər ki, bu da vasitəsilə Fc -antikor fraqmenti komplementə (C) birləşir, yəni komplement antigen-antikor kompleksi ilə bağlanır. Əgər antigen-antikor kompleksi əmələ gəlmirsə, onda komplement sərbəst qalır (Şəkil 13.8). RSK iki mərhələdə həyata keçirilir: 1-ci faza - antigen + antikor + tamamlayıcı üç komponentdən ibarət qarışığın inkubasiyası; 2-ci faza (göstərici) - qarışığa qoyun eritrositlərindən ibarət hemolitik sistem və onlara qarşı anticisimlər olan hemolitik zərdab əlavə etməklə sərbəst komplementin aşkarlanması. Reaksiyanın 1-ci fazasında antigen-antikor kompleksi əmələ gəldikdə komplement birləşir, sonra 2-ci fazada anticisimlərlə sensibilləşmiş eritrositlərin hemolizi baş verməyəcək; reaksiya müsbətdir. Antigen və antikor bir-birinə uyğun gəlmirsə (sınaq nümunəsində antigen və ya antikor yoxdur), komplement sərbəst qalır və 2-ci fazada eritrosit - anti-eritrosit anticisim kompleksinə qoşularaq hemolizə səbəb olur; reaksiya mənfi olur.

RSC bir çox yoluxucu xəstəliklərin, xüsusən də sifilis (Wassermann reaksiyası) diaqnozu üçün istifadə olunur.

Bu reaksiya bakterial, viral, protozoal infeksiyaları olan xəstələrin qan zərdabında antikorları aşkar etmək, həmçinin xəstələrdən təcrid olunmuş virusları müəyyən etmək və tipləşdirmək üçün istifadə olunur. RSC, antigen, antikor və komplementdən əlavə, hemolitik sistemin də iştirak etdiyi, reaksiyanın nəticələrini ortaya qoyan kompleks seroloji reaksiyalara aiddir. RSC iki mərhələdə davam edir: birincisi, komplementin iştirakı ilə antigenin antikorla qarşılıqlı əlaqəsi, ikincisi isə hemolitik sistemdən istifadə edərək komplementin bağlanma dərəcəsinin müəyyən edilməsidir. Bu sistem qoyun qırmızı qan hüceyrələrindən və laboratoriya heyvanlarının qırmızı qan hüceyrələri ilə immunizasiyası nəticəsində əldə edilən hemolitik serumdan ibarətdir. Eritrositlər işlənir - 30 dəqiqə ərzində 37 ° C temperaturda onlara serum əlavə edilərək həssaslaşdırılır. Həssaslaşmış qoyun eritrositlərinin lizisi yalnız hemolitik komplement sisteminə qoşulduqda baş verir. Onun yoxluğunda qırmızı qan hüceyrələri dəyişmir. RSC-nin nəticələri test serumunda antikorların mövcudluğundan asılıdır. Əgər zərdabın tərkibində reaksiyada istifadə olunan antigenə homoloji anticisimlər varsa, onda yaranan antigen-antikor kompleksi komplementi bağlayır və bağlayır. Bir hemolitik sistem əlavə edərkən, bu vəziyyətdə hemoliz baş verməyəcək, çünki bütün tamamlayıcı antigen-antikor kompleksinin xüsusi əlaqəsinə sərf olunur. Qırmızı qan hüceyrələri dəyişməz olaraq qalır, buna görə də test borusunda hemolizin olmaması müsbət RBC kimi qeyd olunur. Serumda antigenə uyğun gələn anticisimlər olmadıqda spesifik antigen-antikor kompleksi əmələ gəlmir və komplement sərbəst qalır. Bir hemolitik sistem əlavə edildikdə, tamamlayıcı ona yapışır və qırmızı qan hüceyrələrinin hemolizinə səbəb olur. Qırmızı qan hüceyrələrinin məhv edilməsi və onların hemolizi mənfi reaksiyanı xarakterizə edir.

RSC hazırlamaq üçün aşağıdakılar lazımdır: xəstənin serumu, tamamlayıcı, qoyun eritrositlərindən və hemolitik serumdan ibarət hemolitik sistem, həmçinin izotonik natrium xlorid məhlulu. Reaksiya seroloji borularda aparılır. Qoyun qırmızı qan hüceyrələri defibrinləşdirilmiş qoyun qanından üç dəfə izotonik natrium xlorid məhlulu ilə yuyulmaqla əldə edilir. Hemolitik zərdab hazır şəkildə ampulalarda istehsal olunur, etiketində onun titri, yəni zərdabın maksimum seyreltilməsi göstərilir ki, bu da tamamlayıcının iştirakı ilə qırmızı qan hüceyrələrinə əlavə edildikdə hələ də hemolizə səbəb olur. Hemolitik zərdab heyvanları, məsələn, dovşanları qoyun qırmızı qan hüceyrələri ilə immunizasiya etməklə əldə edilir. Reaksiyanı qurarkən, serum üçqat titrdə istifadə olunur. Məsələn, hemolitik zərdabın titri 1: 1200, işlək durulması isə 1: 400-dür. Komplement kimi təzə qvineya donuzunun qan zərdabından (24-48 saat ərzində) və ya ampulalarda olan quru komplementdən istifadə olunur. RSC yerinə yetirməzdən əvvəl komplement 1:10 nisbətində seyreltilir və titri - bu reaksiyada istifadə olunan hemolitik sistemlə birləşdirildikdə qırmızı qan hüceyrələrinin hemolizindən əmələ gələn ən kiçik komplement miqdarını təyin etmək üçün titrlənir. Antigenin mümkün anti-komplementar xassələrini nəzərə alaraq, reaksiya verərkən, komplementin müəyyən edilmiş iş titrinə 20-30% artım aparılır.
RSC üçün antigen öldürülmüş bakteriyaların süspansiyonları, bu süspansiyonlardan hazırlanmış ekstraktlar və mikrobların fərdi kimyəvi fraksiyalarıdır. Antigen üçün əsas tələb komplement fəaliyyətinin inhibəsinin olmamasıdır. Tamamlayıcı xüsusiyyətlərə malik olmamalıdır. Antigenin bu xassələrini müəyyən etmək üçün komplement əlavə olaraq reaksiyada istifadə olunan antigenin iştirakı ilə titrlənir. RSC-nin səhnələşdirilməsi üçün müəyyən sxemlər var. Reaksiya nəticələri hemolitik sistemdə qırmızı qan hüceyrələrinin hemolizinin olması və ya olmaması ilə nəzərə alınır. RSC sifilis (Wassermann reaksiyası), gonoreya (Bordet-Gengou reaksiyası), toksoplazmoz, rikketsial və viral xəstəliklərin diaqnostikasında istifadə olunur.

Radial hemoliz reaksiyası (RRH) ) qoyun qırmızı qan hüceyrələri və tamamlayıcı olan bir agar gel quyularına yerləşdirilir. Gelin quyularına hemolitik zərdab (qoyun qırmızı qan hüceyrələrinə qarşı antikorlar) daxil edildikdən sonra onların ətrafında (antikorların radial diffuziyası nəticəsində) hemoliz zonası əmələ gəlir. Bu yolla qrip, məxmərək, gənə ensefalitli xəstələrin qan zərdabında komplement və hemolitik zərdabın, həmçinin anticisimlərin aktivliyini müəyyən etmək mümkündür. Bunun üçün virusun müvafiq antigenləri eritrositlərə adsorbsiya edilir və xəstənin qan serumu bu eritrositləri ehtiva edən gelin quyularına əlavə edilir. Antiviral anticisimlər eritrositlərə adsorbsiya edilmiş viral antigenlərlə qarşılıqlı əlaqədə olur, bundan sonra komplement komponentləri bu kompleksə qoşulur və hemolizə səbəb olur.