Antinuclear antibodies (ANA, ANA, antinuclear antibodies, antinuclear factor-ANF) - paraan ng NIF sa HEp-2 cell lines na may pagtukoy sa uri ng luminescence.- tagapagpahiwatig ng mga sakit sa autoimmune connective tissue. Ang ANA ay isang pangkat ng mga autoantibodies sa mga protina at iba pang bahagi (kabilang ang DNA) na matatagpuan sa nuclei ng mga selula. Ang mga pangunahing indikasyon para sa paggamit: pagbubukod ng diagnosis - systemic lupus erythematosus (pinaniniwalaan na ang ANA ay lumilitaw sa 90% ng mga kaso ng SLE, sa madaling salita, isang negatibong resulta na may posibilidad na halos 90% ay hindi kasama ang diagnosis ng SLE), differential diagnosis systemic collagenosis (systemic lupus erythematosus, scleroderma, periarteritis nodosa, dermatomyositis), talamak na aktibong hepatitis.

Sa ngayon, higit sa 200 ANA ang inilarawan na nagta-target ng mga nucleic acid, histone, nuclear membrane protein, spliceosome component, ribonucleoproteins, nucleolar protein, at centromeres. Kasabay nito, sinisira nila ang connective tissue, na nag-ambag sa pagpapakilala ng kahulugan ng antinuclear factor bilang isang pagsubok para sa mga systemic na sakit ng connective tissue. Ang terminong "antinuclear factor" ay nangangahulugang isang pagsubok para sa pagtuklas ng mga antinuclear antibodies gamit ang paraan ng hindi direktang immunofluorescence.

Ang isa sa mga paraan upang makita ang antinuclear factor sa dugo (antinuclear antibodies) ay ang paraan ng hindi direktang immunofluorescence sa pamamagitan ng paglalapat ng serum ng pasyente sa mga tissue cells ng isang transplantable human HEp-2 cell line (Hep-2 human larynx epithelial carcinoma cells na naglalaman ng iba't ibang nuclear antigens), gamit ang isang may label na conjugate na may mga antibodies ng tao. Ang iba pang mga linya ng cell ng tao ay maaari ding gamitin bilang mga substrate, gayunpaman, dahil sa mahusay na morpolohiya at kadalian ng paglilinang, ito ay mga linya ng Hep-2 na naging pangkalahatang kinikilalang substrate para sa hindi direktang immunofluorescence. Ang isang paraan ng pagtuklas para sa ANF ay binuo ni Tan noong 1982 gamit ang human transplantable epithelioid cell line HEp-2 bilang substrate. Ang cell line na ito, na nagmula sa human laryngeal adenocarcinoma, ay isang malaking polyploid non-keratinizing squamous epitheliocytes na bumubuo ng isang monolayer sa salamin. Ang serum ng pasyente ay pinatuburan ng tissue substrate, at ang mga antinuclear antibodies mula sa serum ng pasyente (kung mayroon) ay nagbubuklod sa kaukulang nuclear antigens. Ang mga autoantibody binding site ay nakita gamit ang fluorescein-labeled anti-human antiserum. Ang mga resulta ng reaksyon ay sinusuri ng mikroskopya gamit ang isang fluorescent microscope at isang visual na pagtatasa ng likas na katangian ng luminescence ng mga nakagapos na antibodies. Kabilang sa mga pakinabang ng HEp-2 (kung ihahambing sa mga cryosection ng mga tisyu ng hayop), mapapansin ng isa ang isang mataas na dalas ng paghahati ng cell, na ginagawang posible na makita ang mga antibodies sa mga antigen na ipinahayag lamang sa panahon ng cell division, at ang kawalan ng isang tissue cell matrix, na nagpapahirap sa pag-visualize ng partikular na luminescence kung ihahambing sa mga histological na seksyon. Sa ilang mga sakit, tulad ng SLE, systemic scleroderma (systemic sclerosis), ilang mga impeksyon, ang immune system ng mga pasyente ay nakikita ang nuclei (nuclear protein) ng mga selula ng kanilang sariling mga tisyu bilang dayuhan, at gumagawa ng mga antibodies sa kanila (antinuclear antibodies - AHA). Kasabay nito, sinisira nila ang connective tissue, na nag-ambag sa pagpapakilala ng kahulugan ng antinuclear factor bilang isang pagsubok para sa mga systemic na sakit ng connective tissue.

Kapag binibigyang-kahulugan ang data, dapat isaalang-alang na ang spectrum ng AHA ay kinabibilangan ng malaking grupo ng mga autoantibodies sa DNA, nucleoproteins, histones, nuclear ribonucleoproteins, at iba pang nuclear component. Kaya, ang pagsubok ay naglalayong makita ang iba't ibang mga antibodies sa mga bahagi ng nucleus at cytoplasm, na unang nakita sa SLE. Dagdag pa pamantayan sa diagnostic ang mga pagsusuri ay pinalawak na may kaugnayan sa pagtuklas ng mga antibodies na ito sa iba pang mga sakit sa connective tissue.

Ang mga pagsusuri sa screening upang matukoy ang kabuuang ANA ay karaniwang gumagamit ng isang set ng mga sumusunod na antigens, na siyang mga pangunahing marker ng autoimmune connective tissue disease: SS-A (Ro), SS-B (La), BNP70, Sm, RNP/Sm, J01, centromere B.
Ang mga pangunahing antigen na ginagamit sa mga modernong kit para sa pagtuklas ng mga nuclear antibodies ng klase ng IgG ay kinakatawan ng sumusunod na hanay:

1. SS-A (Ro) - nuclear ribonucleoproteins, (polypeptides). Ang mga antibodies sa kanila ay matatagpuan, mas madalas, sa systemic scleroderma (60% ng mga kaso), Sjögren's syndrome (hanggang sa 70% ng mga kaso) at sa SLE (hanggang sa 30% ng mga kaso). Ito ay pinaniniwalaan na kung ang mga antibodies na ito ay matatagpuan sa dugo ng mga buntis na kababaihan, kung gayon ito ay isang tagapagpahiwatig ng panganib ng pagtaas sa paglitaw ng neonatal lupus-like syndrome sa isang bagong panganak na bata (neonatal lupus syndrome). Ang mga maternal antibodies na ito ay tumatawid sa inunan at nagdudulot ng pinsala sa fetus, na humahantong sa hemolytic anemia at thrombocytopenia. Kasama sa malubhang kahihinatnan ang pinsala sa sistema ng pagpapadaloy ng puso ng bata (hanggang sa permanenteng pacing). Ito ay nabanggit na sa mga kababaihan na may isang makabuluhang titer ng mga antibodies sa panahon ng pagbubuntis, nang walang halata mga klinikal na palatandaan, lalo pang nagkakaroon ng anumang sakit na autoimmune, kabilang ang SLE.
2. SS-B (La) - mga nukleyar na protina. Ang mga antibodies sa kanila ay nakikita sa hanggang 60% ng mga kaso na may Sjögren's syndrome at sa 15% ng mga kaso na may SLE.
3. Ang Scl-70 ay isang enzyme na protina na kasangkot sa metabolismo ng nucleic acid (topoisomerase-1). Ang mga antibodies sa protina na ito ay pinaka-espesipiko sa systemic scleroderma (hanggang sa 70% ng mga kaso).
4. Ang double-stranded na DNA ay katutubong DNA. Ang mga antibodies sa DNA ay pinaka-espesipiko sa SLE (hanggang sa 80% ng mga kaso) at halos hindi nakikita sa rheumatoid arthritis at scleroderma.
5. RNP/Sm - RNP/Sm antigen complex ay binubuo ng U1-ribonucleoproteins: U1-68, U1-A, U1-C, U5, U6; at mula rin sa Sm-polypeptides: SmA | , SMB | B, SmD, SmE, SmF, SmG. Ang mga antibodies na nabuo laban sa mga antigen na ito ay pinaka-espesipiko para sa magkahalong sakit na nag-uugnay sa tissue - i.e. may mga sintomas ng scleroderma, rheumatoid arthritis, SLE, polymyositis (mga 95% ng mga kaso) at sa mas mababang lawak para sa SLE (hanggang 30% ng mga kaso).
6. Jo-1 - enzyme - aminoacyltransport RNA synthetase. Ang mga autoantibodies sa protina na ito ay diagnostic na makabuluhan sa myositis (polymyositis/dermatomyositis).
7. CENP-B (Centromere) - upang makita ang mga Anti-Centromeric antibodies (Anti-Centromer B), upang masuri ang CREST syndrome (ang sindrom na ito ay isang kumbinasyon ng skin calcification, Raynaud's syndrome, esophageal motility disorders, sclerodactyly, telangiectasia). Ang CREST syndrome ay tumutukoy sa isang variant ng systemic scleroderma (systemic sclerosis). Ang mga antibodies na ito sa mga pasyente ay nagpapahiwatig ng isang kanais-nais na kurso ng systemic scleroderma at nagpapahiwatig ng isang maliit na sugat ng mga panloob na organo.
8. Ang mga Hep-2 cells ay Hep-2 human laryngeal epithelial carcinoma cells na naglalaman ng maraming iba't ibang nuclear antigens, kabilang ang SS-A (Ro) antigen at centromere antigens. Ang mga antibodies sa Hep-2 ay matatagpuan sa mga pasyenteng may polymyositis at dermatomyositis sa hanggang 90% ng mga kaso.
9. Mitochondria (PDC) - PDC - pyruvate dehydrogenase complex. Ang isang malaking grupo ng mga antimitochondrial antibodies ay mga autoantibodies na nabuo laban sa mga enzyme ng pyruvate dehydrogenase complex, na matatagpuan sa mitochondria ng mga cell at kasangkot sa oxidative decarboxylation ng pyruvate.

Kadalasan ang ANA ay matatagpuan sa biliary cirrhosis ng atay.

Ang mga AHA ay hindi karaniwang tumagos sa mga buhay na selula at samakatuwid ay hindi nakakapinsala. Ngunit kung minsan ay bumubuo sila ng mga antigen-antibody complex na nagdudulot ng pinsala sa tissue (tulad ng, halimbawa, sa pinsala sa bato ng SLE). Dahil sa paglahok ng maraming mga organo sa proseso ng pathological, ang diagnostic na halaga ng pagpapasiya ng AHA ay mababa, at ang mga resulta ng pagsusuri ay bahagyang kumpirmahin ang klinikal na data.

Bilang karagdagan sa mga sakit na rayuma, ang ANA ay matatagpuan din sa talamak na aktibong hepatitis sa hanggang 50% ng mga kaso. Ang hitsura (mababang titer) ay posible sa nagpapaalab na sakit, oncology at mga impeksyon sa viral.

• Comparative frequency ng detection ng antinuclear antibodies.
  

  Sakit at kondisyon	Dalas ng pagtuklas, %
  SLE	95-100
  Lupoid hepatitis (bagong pangalan - talamak na autoimmune hepatitis)	70 -80%
  Felty's syndrome (Felty. 1924) - rheumatoid arthritis + splenomegaly + neutropenia + leukopenia + lymphadenopathy.	95-100
  Systemic scleroderma	75-80
  Lupus drug syndrome (hydralazine, procainamide, isoniazid)	Mga 50
  Sjögren's syndrome (Autoimmune systemic lesion ng connective tissue. Ito ay nailalarawan sa pamamagitan ng paglahok sa pathological na proseso ng panlabas na mga glandula ng pagtatago, higit sa lahat salivary at lacrimal, at isang talamak na progresibong kurso).	40-75
  Mga klinikal na malusog na kamag-anak ng isang pasyenteng may SLE	Mga 25
  Discoid lupus erythematosus	15-50
  Talamak na juvenile arthritis, rheumatoid arthritis	15-30
  Nodular periarteritis	15-25
  Dermatomyositis at polymyositis	10-30
  Rayuma	Bandang 5
  Raynaud's syndrome	15-20

Sa batayan ng mga antibodies at ang pagpapasiya ng mga tagapagpahiwatig ng kanilang konsentrasyon sa plasma ng dugo, maraming mga kondisyon ng katawan ang nasuri. Ang isa sa mga tagapagpahiwatig ay ang antinuclear factor, na pinagsasama sa ilalim ng pangalan nito ang isang pangkat ng mga antibodies ng iba't ibang uri na nakadirekta laban sa mga sangkap ng cellular. Kapag natukoy ang naturang kadahilanan, makatuwirang pag-usapan ang tungkol sa isang sakit na autoimmune, lalo na ang systemic lupus erythematosus.

Kahit na ang pagsubok ay pangkalahatan para sa pagtukoy ng maraming mga systemic pathologies ng katawan, sa partikular, tulad ng isang malubhang sakit bilang lupus erythematosus, ang ilang mga kagiliw-giliw na mga tampok ay nauugnay dito. Ginamit ito mula noong 1957, ngunit ang pamamaraan ay naging laganap lamang mula noong huling bahagi ng 80s ng huling siglo. Dapat pansinin na ang pagkakaroon ng mga implant ng dibdib ay nagdaragdag ng titer ng mga antinuclear antibodies, na sinusunod sa 5% hanggang 55% ng lahat ng mga kaso sa mga babaeng pasyente.

Ano ang mga

Ang antibody complex, na kinabibilangan ng antinuclear factor, ay kinakatawan ng higit sa 200 mga tagapagpahiwatig, kadalasan ito ay mga immunoglobulin ng klase G, sa mga bihirang kaso IgM at IgA. Lumilitaw ang mga ito sa mga pathology na nailalarawan sa pamamagitan ng isang autoimmune o rheumatic na likas na katangian ng sugat bilang isang resulta ng kapansanan sa pagpapaubaya ng immune system sa sarili nitong mga tisyu.

Sa ilalim ng ilang mga kundisyon, ang kaligtasan sa sakit ay nagtuturo sa lahat ng mga puwersa nito na hindi lumaban sa mga dayuhang kadahilanan, ngunit laban sa sarili nitong mga tisyu, mga selula, na hindi dapat mangyari nang normal. Ang lumabag na pagpapaubaya sa ilang mga selula, na nakadirekta sa pagsalakay, ay nagkakaroon ng sakit na autoimmune. Ang mga antibodies na ginawa sa kurso ng isang sakit, o mga complex, ay tinatawag na autoimmune.

Maraming tao ang may kaunting autoantibodies, ngunit hindi ito senyales ng sakit. Ang isang malubhang pagkabigo lamang sa kaligtasan sa sakit ay maaaring humantong sa isang pagtaas sa antas ng mga autoantibodies, ito ang dahilan para sa paggawa ng naaangkop na pagsusuri. Ngunit kailangan pa rin itong dagdagan ng iba pang mga pag-aaral, sa partikular, dugo, ihi, pati na rin ang mga klinikal na pagpapakita.

Sa isang taong nagdurusa mula sa systemic lupus erythematosus, ang ANF ay tumataas bago pa man lumitaw ang mga unang sintomas. Sa lahat ng may sakit, 95% ay may mataas na antinuclear factor sa dugo, na kinukumpleto ng mga sintomas ng sakit, na kung saan, ay nagpapatunay sa diagnosis.

Ang mekanismo ng paglitaw ng kadahilanan

Mayroong ilang mga kadahilanan na nag-aambag sa pag-unlad ng sakit sa mga tao. Ang lahat ay nangyayari sa isang tiyak na pagkakasunud-sunod:

1. Naimpluwensyahan ng ultraviolet radiation ng araw balat ang mga proseso ng pre-genetically programmed cell death, na tinatawag na apoptosis, ay inilunsad. Ito ay isang normal na reaksyon ng katawan, gayunpaman, sa mga sistematikong sakit, ang mga lymphocyte ay nagsisimulang mag-migrate nang masinsinan.
2. Dati hindi naa-access, ang mga hindi nakikitang bahagi ng mga cell ay magagamit para sa kaligtasan sa sakit, lalo na, ang cell membrane, nucleoli, histones, nuclear envelope, at iba pa. Nagiging hubad sila, at ang mga macrophage, sa halip na gumamit ng ganoong materyal, ay nagpapasa pa ng impormasyon, na pumukaw sa immune response ng katawan.
3. Ang B-lymphocytes na gumagawa ng antinuclear antibodies ay tumutugon sa signal na ibinigay ng macrophage, nakikipag-ugnayan sila sa kaukulang antigen, na bumubuo ng isang complex.
4. Ang mga complex ay idineposito sa mga lamad ng mga organo at tisyu; ito ay nangyayari nang sagana sa ibabaw ng pader ng daluyan mula sa loob; pandagdag o isang lokal na tugon sa immune ay isinaaktibo.
5. Ang pinsala ay nakakagambala sa paggana ng organ.

Pagsusuri, mga indikasyon

Mayroong ilang mga indikasyon kapag ang isang antinuclear antibody test ay iniutos. Una sa lahat, ito ay isang hinala ng pag-unlad ng systemic lupus erythematosus, Sjögren's syndrome. Kung meron man sistematikong sakit, ang doktor ay naghihinala ng iba, halimbawa, ang antiphospholipid syndrome ay maaaring bumuo laban sa background ng lupus.

Mga sintomas kung kailan dapat magpasuri

Palaging may mga sintomas, ang hitsura nito ay dapat alertuhan ang isang tao, gawin siyang sumailalim sa pagsusuri. Dapat i-orient ng doktor ang pasyente kung mayroong:

1. Arthritis, na ipinakita sa pamamagitan ng pamamaga ng kasukasuan, na may sakit, pamamaga, kapansanan sa kadaliang kumilos, pamumula ng balat sa ibabaw nito, lagnat.
2. Hindi ito makagambala sa pagsusuri para sa pericarditis, pleurisy, ang sanhi nito ay hindi alam.
3. Ang pinsala sa bato na nauugnay sa isang paglabag sa estado ng immune system, ang hitsura ng mga pagbabago sa pagsusuri ng ihi, sa partikular, protina, dugo.
4. Ang isa pang indikasyon ay ang hemolytic variant ng anemia, kung saan ang mga pulang selula ng dugo ay nawasak sa malaking bilang, ang antas ng bilirubin sa dugo at pagtaas ng urinalysis.
5. Ang indikasyon ay isang pagbawas sa antas ng mga platelet, neutrophils sa leukocyte formula.
6. Ang mga pagpapakita sa balat sa anyo ng isang pantal, pampalapot na nangyayari pagkatapos ng pagkakalantad sa araw.
7. Raynaud's syndrome, kung saan pana-panahong nagbabago ang kulay ng mga daliri sa paa at kamay. Sila ay nagiging maputla, asul o mapula, ang sensitivity ay nabalisa, ang mga alalahanin sa sakit.
8. Ang indikasyon ay hindi pangkaraniwan na mga sintomas mula sa neurology o psychiatry.
9. Kung ang temperatura ay tumaas, ang pagkapagod ay bubuo, ang timbang ng katawan ay bumababa, ang mga lymph node ay tumaas.

Mga uri ng pananaliksik

Mayroong dalawang mga pamamaraan na nagbibigay-daan sa iyo upang matukoy ang mga antinuclear antibodies sa dugo. Ang una ay tinatawag na indirect immunofluorescence microscopy. Ang cell line para sa kanya ay nagmula sa adenocarcinoma sa larynx. Kung mayroong mga antinuclear antibodies, nagbubuklod sila sa mga tiyak na antigen, pagkatapos ay idinagdag ang mga label na maaaring kumikinang sa isang tiyak na spectrum ng liwanag. Sa ilalim ng mikroskopyo, nagiging posible upang matukoy ang intensity, uri ng luminescence.

Ang pamamaraan na ito ay kinikilala bilang ang pinakamahusay para sa pagtukoy ng rate ng antinuclear antibodies. Mayroon itong ibang pangalan - lupus test strips.

Ang resulta ng pag-aaral ay ang titer o ang pinakamataas na pagbabanto ng dugo, na nagbibigay ng glow. Kung positibo ang resulta, inilalarawan ang uri ng glow. Ang titer ay tumataas na may malaking akumulasyon ng mga antibodies. Ang isang mababang titer ay maaaring ituring na isang negatibong resulta, habang ang isang mataas na titer ay nagpapahiwatig ng pagtaas sa konsentrasyon ng mga antinuclear antibodies.

Ang pangalawang opsyon sa diagnostic ay isang enzyme immunoassay. Ang kakanyahan nito ay ang mga antibodies na nasa dugo ay nakikipag-ugnayan sa kaukulang antigen, ang resulta ay ang solusyon ay nagbabago ng kulay nito.

Dapat tandaan na ang isang positibong resulta ng pagsusulit ay hindi isang 100% na diagnosis. Ito ay isang senyas na ang isang karagdagang pagsusuri ay kinakailangan, na makakatulong upang makilala ang sakit sa maagang panahon, magreseta ng paggamot. Sa isang negatibong pagsusuri para sa mga kadahilanan ng antinuklear, ang isa ay maaaring magsalita ng kanilang kumpletong kawalan, ngunit ang diagnosis ng isang di-umano'y autoimmune na patolohiya ay hindi ibinukod.

Sapilitan na kumuha ng mga pagsusuri sa dugo para sa iba't ibang mga tagapagpahiwatig. Gayunpaman, ito ay nagkakahalaga ng pag-alala na ang resulta ay maaaring maapektuhan ng ilang mga gamot, pati na rin ang talamak o malalang sakit. Ang isang espesyalista ay palaging makakatulong upang maunawaan ang lahat ng mga intricacies, pagkatapos nito ay magtatatag siya ng diagnosis, magrekomenda kung ano ang susunod na gagawin.

Antinuclear factor sa HEp-2 cell line (ANF) ay isang pagsubok para sa pagtuklas ng mga antinuclear antibodies sa pamamagitan ng hindi direktang immunofluorescence.

Sa systemic lupus erythematosus (SLE) at iba pang systemic rheumatic disease, ang immune response ay nakadirekta laban sa nucleoprotein antigens, i.e. complex ng mga nucleic acid at protina. Ang mga endogenous nucleoprotein complex na ito ay nabuo sa panahon ng proseso ng epithelial cell apoptosis at kahawig ng mga dayuhang viral particle. Pagpapabilis ng mga proseso ng apoptosis sa ilalim ng impluwensya ng ultraviolet irradiation, mga impeksyon sa viral At mga gamot, nagti-trigger ng mga autoimmune na tugon sa SLE. Sa panahon ng apoptosis, ang mga pangunahing antigens ng mga antibodies ay namumuo sa mga apoptotic na katawan, na nagiging target para sa mga autoantibodies. Sa kasalukuyan, humigit-kumulang 200 uri ng antibodies sa mga nucleoprotein at ribo ang inilarawan. mga nucleic acid na tinatawag na antinuclear antibodies. Sa mga sakit na autoimmune, ang mga autoantibodies sa nuclear antigens ay walang direktang cytotoxic effect sa mga selula ng tao, gayunpaman, ang mga immune complex ay maaaring mag-trigger ng immunological na pamamaga, lalo na sa mga lugar kung saan ang mga vessel ay lalo na manipis, kabilang ang sa mga bato, balat, central nervous system, synovial membrane ng mga joints, pleura.

Ang pagsubok na antinuclear factor (ANF) ay ang pangunahing paraan para sa pag-detect ng mga antinuclear antibodies, na nagpapahintulot sa pagtuklas ng mga autoantibodies sa mga nucleic acid (dsDNA, ssDNA, RNA), ribonucleoproteins, pati na rin ang karamihan sa mga conformational at hindi matutunaw na antigens.

Ang mga antinuklear na antibodies ay nakikita sa pamamagitan ng kanilang pagbubuklod sa mga intracellular antigens ng isang tuloy-tuloy na human epithelial cell line (HEp-2). Ang nucleus at cytoplasm ng HEp-2 cells ay naglalaman ng lahat ng antigens na katangian ng katawan ng tao, na ginagawang posible na makita ang lahat ng mga pangunahing antinuclear antibodies sa isang pagsubok. Ang paraan ng hindi direktang immunofluorescence sa HEp2 cell line ay inirerekomenda bilang pamantayang ginto para sa pagtuklas ng mga antinuclear antibodies sa pamamagitan ng nangungunang European (EASIgroup2010) at Amerikanong eksperto (ACRANATaskforce2008). Dahil sa iba't ibang antinuclear antibody antigens, hindi lahat ng mga ito ay maaaring purified o synthesize para magamit sa enzyme immunoassay tests para sa pagtuklas ng mga antinuclear antibodies.

Ang pagiging positibo ng ANF sa HEp-2 cell line ay sinusunod sa systemic lupus erythematosus (SLE), systemic rheumatic disease at maraming mga autoimmune disease, na ginagawa itong isang unibersal na pagsubok sa pagsusuri sa mga pasyente na may autoimmune pathology. Higit sa 90% ng mga pasyente na may diffuse connective tissue disease tulad ng systemic lupus erythematosus at mga anyo ng balat ng sakit na ito, scleroderma at mga varieties nito, mixed connective tissue disease, Sjögren's syndrome. Ang pagtuklas ng ANF ay napakahalaga sa pagsusuri ng juvenile rheumatoid arthritis at autoimmune liver disease. Ang mga miyembro ng pamilyang ito ng mga autoantibodies ay matatagpuan sa iba't ibang mga autoimmune (thyroiditis, diabetes), nakakahawa (viral hepatitis), nagpapasiklab at mga sakit sa oncological. Ang saklaw ng ANF ay umabot sa 1-3% sa mga klinikal na malusog na tao at bahagyang tumataas sa mga taong higit sa 65 taong gulang. Ang mga indibidwal na may mataas na titer ng ANF ay may mas mataas na panganib na magkaroon ng mga sakit na autoimmune.

Mga indikasyon:

• Systemic lupus erythematosus.
• Subacute cutaneous lupus at iba pang uri ng cutaneous lupus.
• Mixed connective tissue disease.
• Sjögren's syndrome at mga kaugnay na sakit.
• Nagkalat at naisalokal na scleroderma, CREST syndrome.
• Mga nagpapasiklab na myopathies (polymyositis at dermatomyositis).
• Juvenile talamak na arthritis.
• autoimmune hepatitis.
• Pangunahing biliary cirrhosis at sclerosing cholangitis.
• polyneuropathy at myelitis.

Paghahanda


Inirerekomenda na mag-donate ng dugo sa umaga, sa pagitan ng 8 a.m. at 12 p.m. Ang dugo ay kinukuha nang walang laman ang tiyan o 4-6 na oras pagkatapos ng huling pagkain. Ang pag-inom ng tubig na walang gas at asukal ay pinapayagan. Sa bisperas ng pagsusuri, dapat na iwasan ang labis na pagkain.

Interpretasyon ng mga resulta
Mga yunit ng sukat: titer.

Mga halaga ng sanggunian:<1:160 (отрицательно).

Ang resulta ng pagpapasiya ng ANF ay ang titer, na kung saan ay ang halaga ng panghuling serum dilution kung saan napanatili ang makabuluhang fluorescence ng nucleus. Kung mas mataas ang denominator ng fraction, mas malaki ang dilution ng serum, mas maraming antibodies sa serum ng pasyente. Ang mataas na serum dilution titers ay sumasalamin sa mataas na affinity at konsentrasyon ng mga autoantibodies.

Ang pagkilala sa mataas na titer (1/640 at mas mataas) ay nagpapahiwatig ng mataas na posibilidad ng systemic rheumatic disease o autoimmune liver disease at nangangailangan ng maingat na klinikal, laboratoryo at instrumental na pagsusuri. Ang kawalan ng mataas na titers ng antinuclear factor ay makabuluhang binabawasan ang posibilidad ng systemic autoimmune disease.

Sa mababang titers (hanggang sa 1/160), ang antinuclear factor ay maaaring maobserbahan sa 1-2% ng mga malulusog na indibidwal at mga kamag-anak ng mga pasyente na may mga sistematikong sakit. Ang dalas ng mga positibong titer sa populasyon ay bahagyang tumataas sa edad. Ang mababang titer ng antinuclear antibodies ay maaaring mangyari sa maraming autoimmune, infectious at oncological na sakit. Ang kawalan ng mataas na titer ng antinuclear antibodies ay makabuluhang binabawasan ang posibilidad ng isang sistematikong proseso ng rheumatic at maaaring gamitin upang ibukod sa halip na kumpirmahin ang diagnosis.

Mga sistematikong sakit sa rayuma
Antinuclear factor (ANF) at uri ng glow

Ang pagpapasiya ng antinuclear factor (ANF) ay ang pangunahing paraan para sa pag-detect ng mga antinuclear antibodies, na nagbibigay-daan sa iyo upang makita ang karamihan sa mga varieties ng antinuclear antibodies, kabilang ang mga autoantibodies sa mga nucleic acid (dsDNA, ssDNA, RNA), conformational at insoluble antigens. Ang resulta ng pagpapasiya ng ANF ay ang pagkakaroon ng mga autoantibodies sa diagnostic titer, ang panghuling serum dilution titer, na sumasalamin sa affinity at konsentrasyon ng mga autoantibodies, pati na rin ang uri ng luminescence ng cell nucleus (test 01.02.15.005). Ang mga katangian ng isang partikular na pamamaraan ay pangunahing nakasalalay sa pagpili ng substrate, na maaaring mag-iba mula sa mga cryosection (atay ng daga o bato) hanggang sa mga kulturang proliferating na linya ng cell (Hep2, Kb, HeLa), pati na rin ang paraan ng pag-aayos ng tissue, na maaaring makaapekto sa pangangalaga ng isang bilang ng mga nuclear ANA antigens.

Ang kasaysayan ng pagbuo ng mga pagsubok para sa pagtuklas ng mga antinuclear antibodies:

Maagang ika-20 siglo - "hyaline body" sa cytoplasm ng mga leukocytes

1948 Hargraves, Richmond, Morton - isang paraan para sa pagtuklas ng mga LE cells sa vitro sa panahon ng pangmatagalang incubation ng isang leuco suspension ng mga pasyente ng SLE

1951 Lee, Michael, Vural - natuklasan ang isang serum factor na nagpapasigla sa phagocytosis ng lymphocyte nuclei ng peripheral blood leukocytes

1957 Holoborow, Weir, Johnson ay gumamit ng paraan ng hindi direktang immunofluorescence na binuo ng Coons noong 1950 upang makita ang ANF sa mga cryosection ng atay ng tao.

1961 Beck - ginamit na tissue mula sa mga hayop sa laboratoryo

1982 Tan - gamit ang tuluy-tuloy na human cell line HEp-2, ang pagsubok na ito ay naging pamantayang ginto para sa pag-detect ng ANA

1958 Jones - natuklasan sa dugo ng mga pasyente na may Sjögren's syndrome ang isang salik na may kakayahang mag-precipitating ng mga extract ng cell nuclei, na nagsilbing impetus para sa paglalarawan ng karamihan sa mga uri ng antinuclear antibodies.

Hindi direktang immunofluorescence sa isang tuluy-tuloy na linya ng Hep2 cell

Ang paraan ng pagtuklas ng ANF ay binuo ni Tan (Tan, 1982) gamit ang human transplantable epithelioid cell line HEp-2 (ATCC ref.no. CCL-23) bilang substrate. Ang cell line na ito, na nagmula sa human laryngeal adenocarcinoma, ay isang malaking polyploid non-keratinized squamous epithelial cell na bumubuo ng isang monolayer sa plastik at salamin.

Larawan: HEp-2 cell line na nabahiran ng hematological stain.

Ang comparative unpretentiousness ng linyang ito, malaking nuclei at ang pagkakaroon ng lahat ng antigens ng tao ay ginawa ang paraan ng hindi direktang immunofluorescence gamit ang tuluy-tuloy na HEp-2 cell line ang pangunahing paraan para sa pag-detect ng ANF. Sa panitikang Ingles ay walang iisang pangalan para sa pamamaraang ito, kung minsan ang paraang ito ay tinutukoy para sa kaiklian bilang FANA (Fluorescent AntiNuclear Antibody detection). Ang kakulangan ng pagkakaisa ng mga katawagan ay lumikha ng kalituhan sa pangalan ng mga pagsubok sa laboratoryo. Minsan sa ilalim ng terminong "antinuclear antibodies" immunological laboratories ay tumutukoy sa mga pagsubok, parehong batay sa mga pamamaraan ng enzyme immunoassay at immunochemical analysis, at ang paraan ng immunofluorescence. Sa panitikan sa wikang Ruso, isinasaalang-alang namin na kinakailangan na panatilihin ang lokal na pangalan ng tagapagpahiwatig na ito - "antinuclear factor" (ANF) upang makilala ang immunofluorescent na paraan mula sa iba pang mga pagsubok para sa pagtuklas ng ANA.

Kinakailangang tuklasin ang ANF ng klase ng IgG, dahil ang pagtuklas ng ANF na kinakatawan ng ibang mga klase ng immunoglobulins ay walang independiyenteng halaga ng diagnostic. Ang mga karaniwang dilution ng serum ng pasyente ay pinatuburan ng tissue substrate, na nagpapahintulot sa mga antinuclear antibodies mula sa serum ng pasyente na magbigkis sa naaangkop na mga target na nuklear. Ang mga autoantibody binding site ay makikita gamit ang fluorescein-labeled anti-human antiserum.

Kahit na ang ibang mga linya ng cell ng tao ay maaaring gamitin bilang mga substrate, dahil sa magandang morpolohiya at kadalian ng paglilinang, ito ay mga linya ng Hep-2 na naging isang pangkalahatang tinatanggap na substrate para sa hindi direktang immunofluorescence. Ang paggamit nito ay nagpapabuti sa sensitivity ng pagsubok dahil sa maliwanag na pag-ilaw kahit na may mga makabuluhang dilution ng serum ng pasyente, at isang malaking, euchromatin-rich core ay nagbibigay-daan sa iyo upang tumpak na ilarawan ang uri ng luminescence. Bilang karagdagan, ang paggamit ng linya ng cell ng Hep-2 ay nag-aambag sa pagtuklas ng mga antibodies ng Ro/SS-A, pati na rin ang mga antibodies sa mga nucleolar antigens, na mahirap kapag gumagamit ng mga cryosection ng tissue mula sa mga hayop sa laboratoryo. Ang iba pang mga bentahe ng HEp-2 ay kinabibilangan ng mataas na dalas ng paghahati ng cell, na ginagawang posible na makita ang mga antibodies sa mga antigen na ipinahayag lamang sa panahon ng paghahati ng cell, at ang kawalan ng tissue cell matrix, na nagpapahirap sa pag-visualize ng partikular na luminescence kung ihahambing sa mga histological na seksyon.

Antinuclear factor titers

Ang titer ng ANF ay tinukoy bilang ang huling pagbabanto ng suwero ng pasyente na may malinaw na fluorescence ng cell nuclei. Kapag gumagamit ng mga tisyu ng mga hayop sa laboratoryo, ang diagnostic titer ng ANF ay 1:8-1:10, habang kapag gumagamit ng HEp-2 cell line, inirerekomendang gamitin ang unang titer na 1:80. Sa kasong ito, ang mga titer ng ANF ay karaniwang mas mababa sa 1:160.

Kapag gumagamit ng mga titer na mas mababa sa 1:160, ang dalas ng mahinang positibong mga resulta sa mga klinikal na malusog na indibidwal ay hindi hihigit sa 5%, at kasabay nito ay hindi papayag na mapalampas ang mga makabuluhang ANA titer sa mga pasyenteng may diffuse connective tissue disease.

Upang matukoy ang panghuling titer, karaniwang ginagamit ang titration sa x2 na hakbang (1:160-1:320 - 1:640 - 1:1280 - 1:2560 - 1:5120, atbp. Ang mas magaspang na titration ay maaari ding gamitin. Laban sa background ng exacerbation ng mga sakit na rayuma, ang ANF titers ay hindi:6 ng 4 na kadalasang nababawasan sa panahon ng 1,6 na mas maraming titer kaysa sa karaniwang 1,6 na titer ng 4. 160-1 :320.

May mga rekomendasyon para sa pagmamarka ng mga resulta ng pagtuklas ng ANF, na nagpapahiwatig ng nilalaman na "sa mga krus". Pinapayagan nito ang mga laboratoryo na makatipid ng mga reagents at mabawasan ang mga gastos sa paggawa para sa pananaliksik. Sa kasong ito, hindi posible ang pagpapasiya ng panghuling titer. Dapat itong isaalang-alang na ang pangwakas na titer ay mas mahalaga kaysa sa dami ng mga autoantibodies na nakatali sa substrate, dahil direktang nauugnay ito sa pagkakaugnay ng kanilang pakikipag-ugnayan sa antigen. Ito ay kanais-nais na matukoy ang pangwakas na titer sa lahat ng mga positibong pasyente, na ginagawang posible na linawin ang presensya sa serum ng mga high-affinity autoantibodies, na mas malapit na nauugnay sa aktibidad ng proseso.

Luminescence na uri ng antinuclear factor nucleus

Nasa unang karanasan ng klinikal na aplikasyon ng hindi direktang immunofluorescence para sa pagtuklas ng ANF gamit ang cryosections ng mga tisyu ng laboratoryo, nabanggit na ang suwero ng mga pasyente na may mga sakit na autoimmune ay "namantsa" ng cell nuclei sa iba't ibang paraan, na humantong sa pumipili na luminescence ng ilang mga istrukturang nuklear. Ang paglilinaw ng hindi pangkaraniwang bagay na ito ay humantong sa paglalarawan ng tinatawag na "mga uri ng luminescence" ng nucleus sa immunofluorescent test. Ito ay dahil sa ang katunayan na ang bawat uri ng ANA ay may mga tiyak na cellular target, bilang isang resulta kung saan ang uri ng luminescence ng nucleus, nucleolus at cytoplasm ng cell ay sumasalamin sa pakikipag-ugnayan ng ANA sa serum ng pasyente na may mga istruktura na naglalaman ng antigen sa loob ng cell. Ang uri ng luminescence ay nakasalalay sa pagkakaroon ng mga partikular na autoantibodies sa serum ng dugo ng pasyente, kung saan ang isang paunang konklusyon ay maaaring gawin tungkol sa mga uri ng AHA na naroroon sa serum na ito. Gayunpaman, ang paggamit ng mga seksyon ng histological tissue ng mga hayop sa laboratoryo ay hindi nagpapahintulot sa isa na mapagkakatiwalaan na matukoy ang uri ng luminescence. Kasabay nito, ang paggamit ng mga naililipat na linya ng cell tulad ng Hep-2 ay ginagawang posible na ilarawan ang isang makabuluhang bilang ng mga opsyon sa paglamlam ng nuklear at cytoplasmic. Mayroong tatlong pangunahing grupo ng mga antigen, ang pagkakaroon ng mga antibodies na tumutukoy sa iba't ibang uri ng luminescence:

Ang uri ng luminescence ng cell nucleus ay makabuluhang pinapataas ang nilalaman ng impormasyon ng pagtuklas ng ANF, at samakatuwid, dapat itong regular na tinutukoy kapag tinutukoy ang tagapagpahiwatig na ito. Ang paggamit ng HEp-2 cells ay ginagawang posible na makilala ang higit sa 20 iba't ibang variant ng nuclear staining, na nakasalalay sa spectrum ng ANA na nasa pinag-aralan na serum. Gayunpaman, para sa isang praktikal na laboratoryo, sapat na upang makilala sa pagitan ng 6 na pangunahing variant ng pagbubuklod ng mga autoantibodies sa mga istruktura ng cell na naglalaman ng antigen.

Maglaan ng homogenous, peripheral, granular (maliit / malaki), nucleolar, centromeric at cytoplasmic na mga uri ng luminescence ng nucleus. Ang bawat uri ng luminescence ay may napaka-katangiang mga tampok na ginagawang posible na makilala ang isang variant mula sa isa pa, pati na rin ang isang hanay ng mga antigen kung saan ang mga autoantibodies ay tumutugon sa sera ng mga pasyente. Ang paglalarawan ng mga uri ng luminescence ay mahalagang klinikal na impormasyon sa sarili nito, bilang karagdagan, ang uri ng luminescence ay maaaring magpahiwatig ng pangangailangan para sa ilang mga pagsubok sa laboratoryo sa hinaharap.

Sa homogenous na uri mamula Ang mga autoantibodies ay tumutugon sa mga antigen na iyon na diffusely distributed sa nucleus, i.e. ay bahagi ng chromatin. Katangian, kapag ang isang homogenous na uri ng luminescence ay nakita, ang mga condensed chromosome ay maliwanag na nabahiran sa paghahati ng mga cell. Ang mga pangunahing yunit ng istruktura ng chromatin ay mga nucleosome - mga complex ng DNA at mga histone. Kaya, ang homogenous na uri ng luminescence ay nagmumungkahi ng pagkakaroon ng mga antibodies laban sa mga nucleosome, dsDNA, at mga antibodies sa mga histone. Ito ay nangyayari sa mga pasyenteng may SLE at drug-induced lupus, gayundin sa mga pasyenteng may scleroderma. Karaniwan, ang pagtuklas ng mataas na titer ng ANF na may homogenous na uri ng luminescence ay nagpapahiwatig ng diagnosis ng SLE.

peripheral na uri Ang luminescence ay madalas na nakahiwalay nang hiwalay, bagaman ito ay isang uri ng homogenous na uri ng luminescence. Ang pagtuklas nito ay isang artifact ng cell fixation, na humahantong sa muling pamamahagi ng chromatin sa nucleus sa paligid. Mahalagang makilala ang peripheral na uri ng luminescence mula sa paglamlam ng nuclear membrane, na nabanggit sa mga sakit sa atay na autoimmune. Ang peripheral na uri ng luminescence ay matatagpuan sa mga pasyenteng may antibodies sa double-stranded na DNA at natutukoy pangunahin sa mga pasyenteng may SLE.

Uri ng butil ay ang pinakakaraniwan at, sa parehong oras, ang pinaka-di-tiyak. Minsan ang ganitong uri ng glow sa domestic literature ay tinatawag na "speckled" o "reticulated". Ang pangalang "butil-butil" ay mas tumpak na sumasalamin sa hindi pangkaraniwang bagay na ito, dahil sa kasong ito, ang mga autoantibodies ay tumutugon sa mga butil sa nucleus, na kumakatawan sa mga supramolecular nucleoprotein complex. Ang ganitong mga complex ng mga protina at nucleic acid ay gumaganap ng isang bilang ng mga function sa nucleus na kinakailangan para sa normal na paggana ng cell. Ang mga naturang complex, sa partikular, ay kinabibilangan ng mga spliceosomes, na nagsasagawa ng post-transcriptional rearrangement ng mRNA na kinakailangan para sa synthesis ng protina sa mga ribosome. Ang komposisyon ay naglalaman ng maraming iba't ibang mga nucleoprotein, na nagiging sanhi ng iba't ibang mga antigenic na target kapag may nakitang butil-butil na uri ng luminescence. Ang pangunahing autoantigens, mga antibodies na humahantong sa visualization ng granular na uri ng luminescence, ay kinabibilangan ng Sm, U1-RNP, SS-A, SS-B antigens, at PCNA. Ang mga cell sa proseso ng paghahati ay nawawala ang karamihan sa mga nabuo na nucleoprotein complex, samakatuwid, ang mga mitotic figure sa cell line na may butil na uri ng luminescence ay hindi nabahiran. Ang butil-butil na uri ng nuclear luminescence ay nabanggit sa mga pasyenteng may SLE, SS, SS, DM/PM, RA, at ilang iba pang mga sakit na autoimmune. Ang mababang titer ng ANF na may butil-butil na uri ay nangingibabaw sa sera ng dugo ng mga klinikal na malusog na indibidwal na may ANF na walang mga palatandaan ng sistematikong sakit.

Pagtukoy ng napakataas na titer ng ANF (1:2560-1:10000) na may magaspang na butil-butil na uri Ang luminescence ng nucleus ay kadalasang nagpapahiwatig ng diagnosis ng mixed connective tissue disease at nangangailangan ng karagdagang pagsusuri upang makita ang RNP antigen, na siyang pangunahing serological marker ng sakit na ito.

Ang mga nucleolar antigens ay maaaring kumilos bilang mga target ng ANA, na humahantong sa pagtuklas uri ng nucleolar fluorescence. Ang pagkilala sa uri ng nucleolar ng luminescence ay katangian ng scleroderma at mga varieties nito. uri ng nucleolar fluorescence ay tinutukoy sa mga pasyente na may mga antibodies sa mga bahagi ng nucleolus, tulad ng RNA polymerase 1, NOR, U 3 RNP, PM/Scl.

uri ng sentromere Ang fluorescence ay napapansin kapag ang mga antibodies sa sentromer ng mga chromosome ay lumitaw, at matatagpuan lamang sa mga naghahati na selula. Ang presensya nito ay katangian ng variant ng CREST ng scleroderma.

Uri ng cytoplasmic Ang glow ay nagpapahiwatig ng mga antibodies sa tRNA synthetases, sa partikular na Jo-1, na nabanggit sa polymyositis. Bilang karagdagan, ito ay napansin sa mga pasyente na may ANA na nakadirekta laban sa iba pang mga bahagi ng cell cytoplasm: mga antibodies sa actin sa autoimmune hepatitis, mga antibodies sa mitochondria sa pangunahing biliary cirrhosis.

Posible na makilala ang isang bilang ng iba pang mga uri ng luminescence, at ang mga uri ng paglamlam ng cell nucleus ay maaaring katangian ng isang partikular na uri ng ANA. Kaya ang mga antibodies sa Scl-70 sa immunofluorescent test sa HEp-20 cells ay nagbibigay ng pinong paglamlam ng nucleus at nucleoli, anti-p80 - luminous na mga tuldok sa nucleus, na wala sa mitotic cells. Gayunpaman, ito ay kinakailangan upang ituro ang pambihira at pagkakaiba-iba ng naturang mga phenomena, na ginagawang hindi kinakailangan upang makilala ang mga ito sa mga karaniwang pag-aaral.

Kadalasan ay maaaring mayroong kumbinasyon ng ilang uri ng luminescence, halimbawa, fine-granular at nucleolar, na karaniwan para sa mga antibodies sa Scl-70. Bukod dito, madalas sa mababang dilution, ang isang uri ng fluorescence ay nangingibabaw, halimbawa, butil-butil, at sa karagdagang mga dilution, ang homogenous o centromeric na mga uri ng fluorescence ay napansin, na nagpapahiwatig ng pagkakaroon ng iba't ibang uri ng ANA sa serum ng pasyente. Kahit na ang uri ng luminescence ay nagbibigay sa doktor ng ilang data na pabor sa isang partikular na diagnosis, kinakailangang isaalang-alang ang medyo mababang pagtitiyak nito at ang iba't ibang mga phenomena na nakatagpo, na nangangailangan ng karagdagang pagsusuri sa laboratoryo.

Ang pagtuklas ng ANA ay ang batayan para sa paggamit ng iba pang mga pagsubok sa laboratoryo na nagpapadalisay sa spectrum ng ANA sa dugo ng mga pasyente. Dahil sa matinding nilalaman ng impormasyon ng pagsusulit na ito, ang karagdagang pagsusuri at pagsusuri ng mga resulta ng kasunod na pagsusuri ay dapat bigyang-kahulugan depende sa mga resulta ng pagtatasa ng uri ng luminescence at titer ng ANF.

Bagama't ang kawalan ng makabuluhang ANA titers ay halos palaging hindi kasama ang diagnosis ng aktibong systemic rheumatic disease, kapag gumagamit ng HEp-2 cell line, sa 2-4% ng mga pasyente na nakakatugon sa pamantayan para sa diagnosis ng SLE, ang ANA ay hindi natukoy o ang mga titer ay mababa. Ang mga pasyenteng ito ay minsang tinutukoy bilang " ANF-negatibong SLE", upang linawin ang diagnosis sa mga naturang pasyente, kinakailangan ang karagdagang pagsusuri, lalo na ang pagtuklas ng mga antibodies sa SS-A antigens. Ang mga antigen na ito ay lubos na natutunaw at maaaring mawala mula sa cell nuclei. Upang mabawasan ang kategoryang ito ng mga pasyente, ang kumplikadong pagsusuri ay ginagamit, kabilang ang pagpapasiya ng mga antibodies sa mga na-extract na nuclear antigens, ang tinatawag na " screening ng sakit sa connective tissue», pagsubok 000723. Ang isang negatibong resulta ng naturang pagsusuri ay ginagawang posible na may napakataas na posibilidad na ibukod ang diagnosis ng SLE at iba pang mga systemic rheumatic disease.

Isang paraan ng pananaliksik gamit ang HEp-2 epithelial cells ng tao, na nagpapahintulot sa pagtuklas ng mga antinuclear antibodies, isa sa mga marker ng systemic na sakit ng connective tissue.

Mga kasingkahulugan ng Ruso

ANF, antinuclear antibodies, antinuclear antibodies (ANA).

Ingles na kasingkahulugan

Antinuclear Antibodies (ANA), Hep-2 Substrate, ANA-Hep2, Fluorescent AntiNuclear Antibody detection (FANA).

Paraan ng pananaliksik

Hindi direktang reaksyon ng immunofluorescence.

Anong biomaterial ang maaaring gamitin para sa pananaliksik?

Dugo ng ugat.

Paano maayos na maghanda para sa pananaliksik?

Huwag manigarilyo sa loob ng 30 minuto bago mag-donate ng dugo.

Pangkalahatang impormasyon tungkol sa pag-aaral

Ang pagpapasiya ng antinuclear factor (ANF) ay ang "gold standard" para sa pagtuklas ng mga antinuclear antibodies (ANA) at pag-diagnose ng mga sakit na autoimmune.

Ang pathogenesis ng systemic connective tissue disease (CCTD) ay malapit na nauugnay sa mga karamdaman sa immune system at pagtaas ng produksyon ng mga antibodies sa mga istruktura ng sariling mga selula. Autoantibodies sa mga bahagi ng cell nucleus - antinuclear antibodies - nakikipag-ugnayan sa mga nucleic acid at protina ng nucleus, cytoplasmic antigens, na kung saan ay ipinahayag sa pamamagitan ng nagpapasiklab na pagbabago sa mga tisyu at organo, sakit sa mga kasukasuan at kalamnan, matinding pagkapagod, pagbaba ng timbang, mga pagbabago sa balat. Ang mga ANA ay matatagpuan sa maraming mga autoimmune na sakit, ngunit pinakakaraniwan sa systemic lupus erythematosus (SLE). Ang ANA ay matatagpuan sa higit sa 90% ng mga pasyente na may systemic connective tissue disease; sa kasalukuyan, humigit-kumulang 200 varieties ang inilarawan, na pinagsama ng isang pangalan - antinuclear factor.

Kapag tinutukoy ang ANF sa pamamagitan ng hindi direktang pag-ilaw, ang inilipat na linya ng human laryngeal adenocarcinoma epithelial cells HEp-2 ay mas madalas na ginagamit. Ang mga selulang HEp-2 ay isang napaka-maginhawang substrate para sa pananaliksik sa laboratoryo, dahil mayroon silang malaking nuclei at lumalaki sa isang layer sa mga slide. Natutukoy ang ANA sa pamamagitan ng pagbubuklod sa intracellular antigens ng HEp-2 cells.

Sa pag-aaral, ang HEp-2 epithelial cells ay lumaki sa mga baso, naayos at natuburan ng diluted na blood serum ng pasyente. Pagkatapos alisin ang labis na suwero, ang mga selula ay pinatuburan ng mga antibodies na may label na fluorescein, pagkatapos ay hugasan muli at susuriin sa ilalim ng isang fluorescence microscope. Sa kasong ito, tinutukoy ang titer ng antibody at ang uri ng luminescence. Ang titer na higit sa 1:160 ay itinuturing na makabuluhang diagnostic. Sa panahon ng exacerbation ng mga sakit na rayuma, lumampas ito sa 1:640, at sa panahon ng pagpapatawad ay bumababa ito sa 1:160-1:320. Ang mas maraming antibodies, mas mataas ang titer. Ayon sa uri ng luminescence, posible na magtatag ng mga target para sa mga antinuclear antibodies, na may malaking kahalagahan sa klinikal at tinutukoy ang mga taktika ng karagdagang pagsusuri ng pasyente. Ang mga pangunahing ay peripheral, butil-butil (maliit/malaki), nucleolar, centromeric at cytoplasmic na mga uri ng nuclear staining. Ang bawat uri ng glow ay may napaka-katangiang mga tampok na ginagawang posible na makilala ang isang variant mula sa isa pa.

Ang homogenous (diffuse) staining ay nauugnay sa pagkakaroon ng mga antibodies sa double-stranded na DNA, mga histone at katangian ng SLE at drug-induced lupus.

Ang peripheral luminescence ay dahil sa peripheral distribution ng chromatin sa nucleus, nauugnay sa mga antibodies sa DNA, at partikular para sa SLE. Ang ganitong uri ng luminescence ay mahalaga upang makilala ang pagkakaiba mula sa paglamlam ng nuclear membrane, na nangyayari sa mga autoimmune na sakit sa atay.

Ang granular (batik-batik, reticulated) na paglamlam ay ang pinakakaraniwan at hindi gaanong tiyak; ito ay natutukoy sa maraming mga sakit na autoimmune. Ang mga autoantigen sa kasong ito ay mga nucleoprotein complex sa nucleus (Sm, U1-RNP, SS-A, SS-B antigens at PCNA).

Ang napakataas na titer ng ANF na may malaking-butil na uri ng luminescence ay kadalasang nagpapahiwatig ng magkahalong sakit sa connective tissue.

Ang paglamlam ng nuklear (nucleolar) ay dahil sa pagbuo ng antibody sa mga bahagi ng nucleolus (RNA polymerase-1, NOR, U 3 RNP, PM / Scl), ay nakita sa scleroderma, Sjögren's disease. Minsan tumataas ang AHA sa mga endocrine disease (type 1 diabetes mellitus, thyroiditis, thyrotoxicosis, polyendocrine syndrome), mga sakit sa balat (psoriasis, pemphigus), sa panahon ng pagbubuntis, pagkatapos ng organ at tissue transplantation, sa mga pasyenteng nasa hemodialysis.

Lumilitaw ang centromeric luminescence sa pagkakaroon ng mga antibodies sa centromere ng mga chromosome at katangian ng isang anyo ng scleroderma - CREST syndrome.

Ang cytoplasmic na uri ng luminescence ay nauugnay sa mga antibodies sa tRNA synthetase, partikular sa Jo-1, na tipikal para sa dermatomyositis at polymyositis. Ang ganitong uri ng paglamlam ay tinutukoy din sa pagkakaroon ng mga antibodies sa iba pang mga bahagi ng cytoplasm sa autoimmune hepatitis, pangunahing biliary cirrhosis.

Ang sabay-sabay na pagtuklas ng iba't ibang uri ng luminescence ay nagpapahiwatig ng pagkakaroon ng iba't ibang uri ng antibodies.

Sa mga malulusog na indibidwal, ang fine-grained fluorescence ay maaaring matukoy sa mababa, katamtaman, o mataas na titer ng AHA, ngunit ang karaniwang mga coarse-grained o homogeneous na mga uri ng fluorescence ay hindi dapat makita.

Depende sa mga resulta ng pagtatasa ng uri ng luminescence, ang mga karagdagang taktika para sa paggamot sa pasyente ay binuo at ang mga karagdagang pag-aaral ay inireseta upang linawin ang spectrum ng ANA.

Ano ang ginagamit ng pananaliksik?

• Para sa diagnosis ng systemic connective tissue disease.
• Para sa differential diagnosis ng mga sakit na rayuma.
• Upang suriin ang pagiging epektibo ng therapy para sa mga sakit na autoimmune.
• Upang masubaybayan ang kurso ng systemic connective tissue disease.

Kailan nakaiskedyul ang pag-aaral?

• May mga sintomas ng isang sakit na autoimmune (matagalang lagnat, pananakit ng kasukasuan, pagkapagod, pagbaba ng timbang, mga pagbabago sa balat).
• Kapag nakita ang mga pagbabago na katangian ng systemic connective tissue disease (nadagdagang ESR, C-reactive na antas ng protina, nagpapalipat-lipat na mga immune complex).

Ano ang ibig sabihin ng mga resulta?

Mga halaga ng sanggunian

Resulta: negatibo.

Pamagat: 1:160.

Mga dahilan para sa pagtaas ng titer ng ANF sa HEp-2 cells:

• systemic lupus erythematosus (sa 95% ng mga kaso),
• dermatomyositis/polymyositis,
• systemic scleroderma (sa 60-90% ng mga kaso),
• Sjögren's syndrome (sa 40-70% ng mga kaso)
• mixed connective tissue disease (Sharpe's syndrome),
• Raynaud's Syndrome,
• discoid lupus,
• panggamot na lupus,
• rheumatoid arthritis,
• necrotizing vasculitis,
• Nakakahawang mononucleosis,
• leukemia,
• malignant neoplasms (pangunahin ang lymphoma),
• malubhang myasthenia gravis,
• infective endocarditis,
• talamak na autoimmune hepatitis,
• pangunahing biliary cirrhosis ng atay,
• tuberkulosis,
• pneumoconiosis,
• interstitial pulmonary fibrosis.

Mga uri ng glow

uri ng glow	Para saan ito tipikal?
homogenous	Para sa SLE, drug-induced lupus, systemic scleroderma, chronic active hepatitis
Peripheral
butil-butil	Para sa SLE, Sjögren's syndrome, mixed connective tissue disease, rheumatoid arthritis
nucleolar	Para sa polymyositis/dermatomyositis, scleroderma, Sjogren's syndrome, SLE
Centromeric	Para sa CREST syndrome (calcification ng balat, Raynaud's syndrome, esophageal dysfunction, sclerodactyly, telangiectasia)
cytoplasmic	Para sa dermatomyositis/polymyositis, autoimmune liver disease, primary biliary cirrhosis

Ano ang maaaring makaapekto sa resulta?

• Ang maling positibong resulta ay nag-aambag sa:

• • edad na higit sa 60-65 taon (sa 10-37% ng mga kaso);
  • ang paggamit ng mga gamot na maaaring humantong sa drug lupus (acetazolamide, carbidopa, chlorothiazide, chlorpromazine, clofibrate, ethosuximide, gold salts, griseofulvin, hydralazine, isoniazid, lithium salts, methyldopa, oral contraceptives, penicillin, phenylbutadine, prinicillin, phenylbutadine, reserpine, streptomycin, sulfanilamide, tetracycline, thiazide diuretics).

• Ang pag-inom ng glucocorticosteroids (prednisolone, dexamethasone, metipred) minsan ay humahantong sa isang maling negatibong resulta.

Mahalagang Tala

• Sa 5% ng mga kaso ng SLE, posible ang negatibong resulta ng pagsusuring ito (ANF-negatibong SLE). Sa ganitong mga sitwasyon, upang linawin ang diagnosis, kinakailangan upang matukoy ang mga antibodies sa SS antigens (Ro).
• Ang isang positibong resulta ng pagsusuri ay hindi ganap na patunay ng isang sakit na autoimmune. Sa malusog na tao, sa 3-13% ng mga kaso, ang titer ng ANF ay tumaas at umabot sa 1:320.
• Dapat suriin ang mga resulta ng pagsusulit kasabay ng klinikal na data at iba pang mga parameter ng laboratoryo.
• Kung positibo ang resulta ng pag-aaral, inirerekumenda na matukoy ang pagtitiyak ng ANA sa pamamagitan ng immunoblot.

• Antibodies sa double-stranded DNA (anti-dsDNA), screening
• Antibodies sa nuclear antigens (ANA), screening
• Antibodies sa na-extract na nuclear antigen (ENA-screen)
• Antibodies sa cardiolipin, IgG at IgM
• Antinuclear antibodies (anti-Sm, RNP, SS-A, SS-B, Scl-70, PM-Scl, PCNA, CENT-B, Jo-1, histones, nucleosomes, Ribo P, AMA-M2), immunoblot